|
Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] The magnesium transporter A (MgtA) is a magnesium transporting P-type ATPase present in prokaryotes and plants (Subramani et al., 2016). In Salmonella typhimurium and Escherichia coli (E. coli), MgtA is expressed only in magnesium limiting conditions and plays an important role in Mg2+ homeostasis (Groisman et al., 2013). The transcription of mgtA is regulated by the two-component system PhoP/PhoQ (Soncini et al., 1996; Kato et al., 1999). The membrane bound histidine kinase, PhoQ, senses low Mg2+ concentration in the periplasmic space and phosphorylates its cognate response regulator, PhoP, which initiates mgtA transcription (Groisman et al., 2013). MgtA is targeted to the ...
[摘要] 镁转运蛋白A（MgtA）是存在于原核生物和植物中的镁转运P型ATP酶（Subramani等，2016）。在鼠伤寒沙门氏菌和大肠杆菌（Escherichia coli）（大肠杆菌）中，MgtA仅在镁限制条件下表达，并在Mg2 +稳态中起重要作用（Groisman等，2013）。 mgtA的转录由双组分系统PhoP / PhoQ（Soncini等人，1996; Kato等，1999）调节。膜结合的组氨酸激酶PhoQ感测周质空间中的低Mg2 +浓度，并磷酸化其启动mgtA转录的同源反应调节因子PhoP（Groisman等，2013）。通过将Mg2 +导入细胞质，MgtA靶向质膜并促进低Mg2 +条件下的细菌存活。矮牵牛的MgtA同源物（PH1）在液泡膜中发现，涉及花瓣的着色（Faraco等，2014）。作为理解MgtA Mg2 +转运的分子细节的第一步，我们描述了可用于生物化学和生物物理学研究的大肠杆菌MgtA的纯化的详细方案。在大肠杆菌DH5α中克隆了在N末端具有六氨基组氨酸标签的重组大肠杆菌MgtA，并在大肠杆菌C43（DE3）中通过发酵至OD> 6进行表达。细胞裂解在高压均化器并通过超速离心分离膜。用洗涤剂十二烷基-β-D麦芽糖苷溶解膜蛋白质。通过亲和力和尺寸排阻色谱纯化MgtA。纯化的MgtA的最终产量每3g湿细胞沉淀达到〜1mg MgtA。
|