| Rapid and Simplified Induction of Neural Stem/Progenitor Cells (NSCs/NPCs) and Neurons from Human Induced Pluripotent Stem Cells (hiPSCs)
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Human induced pluripotent stem cells (iPSCs) and their progeny displaying tissue-specific characteristics have paved the way for regenerative medicine and research in various fields such as the elucidation of the pathological mechanism of diseases and the discovery of drug candidates. iPSC-derived neurons are particularly valuable as it is difficult to analyze neural cells obtained from the central nervous system in humans. For neuronal induction with iPSCs, one of the commonly used approaches is the isolation and expansion of neural rosettes, following the formation of embryonic bodies (EBs). However, this process is laborious, inefficient, and requires further purification of the cells. To overcome these limitations, we have developed an efficient neural induction method that allows for ...
[摘要] [摘要]人类诱导的多能干细胞（iPSC）及其后代具有组织特异性，为再生医学的研究铺平了道路，并在疾病的病理机制阐明和候选药物的发现等领域进行了研究。iPSC集-来源的神经元是特别有价值的，因为它是难以分析神经细胞获自人类的中枢神经系统。对于用iPSC诱导神经元，最常用的方法之一是在形成胚体（EB）之后分离和扩展神经玫瑰花结。然而，该过程费力，效率低下，并且需要进一步纯化细胞。为了克服这些限制，我们已经开发出一种高效神经诱导方法，该方法允许来自于7天内的iPSC神经干/祖细胞（NSCs / NPC的）的产生和功能的成熟神经元的。我们的方法产生一个PAX6 -阳性同质细胞群中，皮质神经干细胞/ NPC的，和t他所得的NSCs / NPC的可冷冻保存，膨胀，并分化在功能性成熟神经元。此外，我们的协议将比其他方法便宜，因为该协议在神经诱导期间需要较少的神经补充。本文还介绍了FM1 - 43成像测定法中，其是用于所述的iPSC衍生的突触前评估中有用的人类神经元。该协议为生成NSC / NPC和神经元提供了一种快速且简化的方法，使研究人员能够建立体外细胞模型来研究脑部疾病的病理学。
[背景]人类iPSC于2007年通过使用四种转录因子（Oct4，Sox2，Klf4和c-Myc）对皮肤成纤维细胞进行重编程而首次建立，并且表现出与胚胎干细胞（ESCs）相似的特征，包括其多能性和自我-更新（Takahashi等，2007； ...
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| An in vitro Model of Neuron-macrophage Interaction to Generate Macrophages with Neurite Outgrowth Properties
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Macrophages are known to play beneficial roles in axon regeneration after nerve injury. To develop an in vitro model in which injury signals can elicit pro-regenerative macrophage activation, we established co-cultures consisting of adult dorsal root ganglia sensory neurons and peritoneal macrophages and added cAMP analogue dibutyryl cAMP. The conditioned medium collected from the co-cultures exhibited robust neurite outgrowth activities. The neurite outgrowth activities were almost completely abrogated by addition of minocycline, a macrophage deactivator, indicating that factors responsible for neurite outgrowth are produced by activated macrophages.
[摘要] 已知巨噬细胞在神经损伤后的轴突再生中发挥有益作用。 为了开发一种体外模型，其中损伤信号可以引发再生巨噬细胞活化，我们建立了由成体背根神经节感觉神经元和腹膜巨噬细胞组成的共培养物，并加入cAMP类似物二丁酰基cAMP。 从共同培养物收集的条件培养基表现出强烈的神经突生长活动。 通过添加米诺环素（巨噬细胞减活剂）几乎完全消除神经突生长活动，表明负责神经突生长的因子是由活化的巨噬细胞产生的。
【背景】成年哺乳动物的CNS神经元在损伤后不会自发再生轴突。 预处理周围神经损伤允许背根神经节（DRG）感觉轴突通过促进再生相关基因的表达来再生中心分支。 我们以前已经表明，预处理损伤后DRG中的活化巨噬细胞有助于提高DRG感觉神经元的内在再生能力（Kwon等，2013）。 为了确定参与神经损伤后巨噬细胞活化的分子因子，我们开发了体外模型，其中神经元 - 巨噬细胞相互作用由cAMP引起，cAMP是增强神经元再生能力的众所周知的试剂。 与使用酵母聚糖激活巨噬细胞的以前的模型相比，我们的模型在预处理外周损伤模型中使用类似于分子事件的更多的生理刺激。
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| Detection of ALT Associated Promyelocytic Leukemia Nuclear Bodies (APBs) by Immunofluorescence-FISH (IF-FISH)
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Author:
Date:
2014-12-05
[Abstract] The activation of functions that counteract the physiological shortening of telomeres in rapidly proliferating cell is prerequisite for the progression of cancer cells to full malignancy (Collado et al., 2007). In most human cancers, the length of telomere is maintained through up-regulation of telomerase whereas a telomerase-independent pathway, termed Alternative Lengthening of Telomeres (ALT) is active in about 10-15% of cancers (Johnson and Broccoli, 2007; Heaphy et al., 2011). One characteristic feature of ALT is the formation of ALT-associated Promyelocytic Leukemia nuclear bodies (APBs) (Lang et al., 2010; Yeager et al., 1999). APBs contain Promyelocytic Leukemia nuclear bodies (PML-NB) components such as PML, SP100 and SUMO, telomeric DNA and ...
[摘要] 抵抗快速增殖细胞中端粒的生理学缩短的功能的激活是癌细胞进展为完全恶性肿瘤的前提条件（Collado等人，2007）。在大多数人类癌症中，通过端粒酶的上调维持端粒长度，而称为替代端粒长径（ALT）的端粒酶非依赖性通路在约10-15％的癌症中是有活性的（Johnson和Broccoli，2007; Heaphy et al。，2011）。 ALT的一个特征是ALT相关的早幼粒细胞白血病核体（APB）的形成（Lang等人，2010; Yeager等人，1999）。 APB含有早幼粒细胞白血病核体（PML-NB）组分如PML，SP100和SUMO，端粒DNA和端粒相关蛋白，包括shelterin组分TRF1，TRF2，POT1，TIN2，TPP1和Rap1（Yeager等，/em，1999）。此外，APB含有参与DNA修复的蛋白质。特别地，同源重组机器的组分的存在表明APB可以通过促进端粒模板的同源重组来促进端粒延长（Nabetani等人，2004; ...
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