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Date:
2017-08-20
[Abstract] The flow cytometric quantitation of DNA content by DNA-binding fluorochrome, propidium iodide (PI) is the most widely used method for cell cycle analysis. However, the commonly used methods are time-consuming and labor-intensive and are incompatible with staining of mitotic markers by fluorescent-labeled antibodies. Here, we report an optimized simple protocol for rapid and simultaneous analysis of characteristic mitotic phosphorylated proteins and DNA content, permitting the quantification of cells in mitosis, G1, S and G2 stage in a single assay. The protocol detailed here employs detergent-based hypotonic solution to rapidly permeabilize cells and allows simultaneous staining of DNA with PI and mitotic marker, phospho-Histone H3, with specific antibody within 20 ...
[摘要] DNA结合荧光染料，碘化丙啶（PI）对DNA含量的流式细胞定量是细胞周期分析中使用最广泛的方法。 然而，常用的方法是耗时且劳动密集的，并且与通过荧光标记的抗体对有丝分裂标记物的染色不相容。 在这里，我们报告了一个优化的简单方案，用于快速和同时分析特征有丝分裂磷酸化蛋白和DNA含量，允许在单次测定中有丝分裂，G1，S和G2期细胞的定量。 这里详述的方案采用基于洗涤剂的低渗溶液来快速透化细胞，并允许在20分钟内同时用PI和有丝分裂标记物磷酸组蛋白H3与特异性抗体染色DNA。 该方案仅需要廉价和商业可用的试剂，并且还能够快速和完整地分析细胞周期特征。
【背景】通过流式细胞术进行细胞周期分析主要基于用碘化丙啶（PI）染色测量DNA含量。 PI的化学计量特性确保DNA含量的准确定量，并且允许我们揭示G1，S和G2细胞周期阶段或G1期细胞死亡期细胞的分布，后者以DNA片段化为特征。用于基于PI的DNA定量的大多数常用方法需要使用酒精或醛固色，这是耗时且劳动密集型的。此外，这些方法与通过荧光标记的抗体对有丝分裂标记物的染色不相容。因此，我们采用和优化了以前建立的低渗缓冲液以使细胞透化，允许用PI和有丝分裂标记物磷酸组蛋白H3（pH3）同时染色DNA与pH3特异性抗体（Riccardi等人，2006; Liu et al。 ...
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