| Modeling NOTCH1 driven T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia in Mice
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) is an aggressive hematological malignancy that arises from transformation of T-cell primed hematopoietic progenitors. Although T-ALL is a heterogenous and molecularly complex disease, more than 65% of T-ALL patients carry activating mutations in the NOTCH1 gene. The majority of T-ALL–associated NOTCH1 mutations either disrupt the negative regulatory region, allowing signal activation in the absence of ligand binding, or result in truncation of the C-terminal PEST domain involved in the termination of NOTCH1 signaling by proteasomal degradation. To date, retroviral transduction models have relied heavily on the overexpression of aggressively truncated variants of NOTCH1 (such as ICN1 or ΔE-NOTCH1), which result in ...
[摘要] [摘要 ] T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）是一种侵袭性血液恶性肿瘤，其起源于T细胞引发的造血祖细胞的转化。尽管T-ALL是一种异质且分子复杂的疾病，但超过65％的T-ALL患者在NOTCH1 基因中带有激活突变。大多数与T-ALL相关的NOTCH1 突变要么破坏负调控区，允许在没有配体结合的情况下激活信号，要么导致蛋白酶体降解终止NOTCH1信号终止所涉及的C末端PEST域被截短。迄今为止，逆转录病毒转导模型在很大程度上依赖于侵袭性截短的变种的过度表达。 NOTCH1 （例如ICN1或ΔE-NOTCH1）可导致信号传导的超生理水平，并且在人类T-ALL中很少见。当前方案描述了小鼠骨髓分离，造血干细胞和祖细胞（HSC）富集，然后逆转录病毒转导的致癌突变体形式的NOTCH1受体（NOTCH1-L1601P-ΔP）的方法，该方法与获功能突变最常见于患者样品中。组成型活性NOTCH1的这种强制表达的标志是胸腺外未成熟T细胞发育的瞬时波，此波在致癌性转化为T-ALL之前。此外，该方法通过允许白血病细胞与微环境之间的串扰来模拟体内白血病的转化和进展，这是基于细胞系的体外研究无法解释的一个方面。因此，HSC转导和移植模型更真实地概括了人类疾病的发展，为进一步的体内和离体功能研究提供了高度全面和通用的工具。
[背景 ] ...
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| Myeloid Progenitor Transformation Assay
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Numerous oncogenes have been identified to cause leukemia. For example, chromosomal translocation generates various fusion genes of the mixed-lineage leukemia (MLL) gene and a partner gene in leukemia, whose gene products transform primary myeloid progenitors into an immortalized state. To characterize the transforming ability of leukemic oncogenes, researchers in the field have developed an ex vivo murine myeloid transformation assay using retroviral gene transduction and its protocol has been improved over the past 10 years. Here, we provide the detailed procedure for this assay.
[摘要] 许多致癌基因已被确定为导致白血病。 例如，染色体易位在白血病中产生混合谱系白血病（MLL ）基因和伴侣基因的各种融合基因，其基因产物将原始骨髓祖细胞转化为永生状态。 为了表征白血病癌基因的转化能力，本领域的研究人员已经利用逆转录病毒基因转导开发了一种离体小鼠骨髓转化试验，其方案在过去的10年中得到了改进。 在这里，我们提供了这个检测的详细程序。
【背景】染色体易位产生多种导致白血病的MLL融合基因（Meyer等人，2017）。野生型混合谱系白血病（MLL）蛋白质起着转录调节剂的作用，其在造血不成熟祖细胞中增强包括同源框（homoxox（Hox））基因在内的一组基因的表达（Jude等。，2007）。在正常造血期间，Hox基因在干/祖细胞部分中表达，但在分化过程中转录下调（Somervaille和Cleary，2006; Yokoyama等人， 2013年）;然而，MLL融合蛋白组成性地上调其靶基因并阻断分化以在离体培养条件下建立永生状态。最近，我们报道了MLL-ENL和MLL-AF10融合蛋白招募AF4以激活转录并且还募集DOT1L复合物以维持相同靶基因的转录以有效地转化造血祖细胞（Okuda等人， ...
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| In vivo Leukemogenesis Model Using Retrovirus Transduction
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Various genetic alterations such as chromosomal translocation cause leukemia. For examples, gene rearrangements of the mixed-lineage leukemia (MLL) gene generate MLL fusion genes, whose products are potent oncogenic drivers in acute leukemia. To better understand the mechanism of disease onset, several murine leukemia models using retroviral gene transduction, xenograft, or Cre-mediated chromosomal translocation have been developed over the past twenty years. Particularly, a retroviral gene transduction-mediated murine leukemia model has been frequently used in the leukemia research field. Here, we describe the detailed protocol for this model.
[摘要] 各种基因改变如染色体易位导致白血病。 例如，混合谱系白血病（MLL ）基因的基因重排产生MLL 融合基因，其产物是急性白血病中有效的致癌驱动因子。 为了更好地理解疾病发生的机制，过去二十年来已经开发了几种使用逆转录病毒基因转导，异种移植或Cre介导的染色体易位的鼠白血病模型。 特别地，逆转录病毒基因转导介导的鼠白血病模型已经在白血病研究领域中经常使用。 在这里，我们描述这个模型的详细协议。
【背景】基因重排产生混合谱系白血病（MLL ）融合基因，导致高度侵袭性的急性白血病。 MLL重排往往伴随着少量额外的遗传改变和不良的临床结果（Andersson等人，2015）。野生型MLL增强和维持包括同源框（Hox）基因在内的一部分基因的表达，以刺激未成熟祖细胞的扩增（Jude等人，2007年）。在未成熟的祖细胞/干细胞组分中，Hoxa9和emis1的表达最高，但随着细胞分化逐渐下降，并最终在终末分化的细胞组分中减少（Somervaille和Cleary，2006; Yokoyama et al。 ，2013）。 MLL融合蛋白组成性地上调包括Hoxa9和Meis1在内的靶基因的表达，使未成熟的祖细胞永生化，并在体内引起白血病 （Ayton和Cleary，2003; ...
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