| Assessing Rates of Long-distance Carbon Transport in Arabidopsis by Collecting Phloem Exudations into EDTA Solutions after Photosynthetic Labeling with [14C]CO2
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Phloem loading and transport of photoassimilate from photoautotrophic source leaves to heterotrophic sink organs are essential physiological processes that help the disparate organs of a plant function as a single, unified organism. We present three protocols we routinely use in combination with each other to assess (1) the relative rates of sucrose (Suc) loading into the phloem vascular system of mature leaves (Yadav et al., 2017a), (2) the relative rates of carbon loading and transport through the phloem (this protocol), and (3) the relative rates of carbon unloading into heterotrophic sink organs, specifically roots, after long-distance transport (Yadav et al., 2017b), We propose that conducting all three protocols on experimental and control plants provides a ...
[摘要] 来自光合自养源的光合同化物的韧皮部装载和运输到异养宿主器官是必不可少的生理过程，其帮助植物的不同器官作为单一的统一生物体起作用。我们提出了三种方案，我们经常使用它们相互结合来评估（1）蔗糖（Suc）加载到成熟叶片的韧皮部血管系统中的相对比率（Yadav等人，2017a）， （2）通过韧皮部的碳载量和转运的相对速率（本方案）;（3）长距离运输后碳向异养池器官，特别是根部卸载的相对速率（Yadav等，我们建议，在实验和对照植物上进行所有三种方案提供了全植物碳分配的可靠比较，并将与单独进行的单个方案相关的模糊度最小化（Dasgupta等人， 2014年;卡迪尔卡尔等人，2016年）。在该方案中，在源叶中光致同化[14C] CO 2 2-，并且通过将韧皮部流出物收集到EDTA溶液中，随后进行闪烁计数来量化光合同化物的韧皮部负载和转运。
【背景】通过韧皮部将光合自养源组织中的还原碳和其他化合物分配到异养池组织是影响植物生长和产量的关键生理过程。由于这一核心作用，有兴趣从植物生物学的许多领域分析和量化韧皮部含量。然而，收集真正的韧皮部汁液是困难的，因为易位流一般在高静水压力下，而且筛分元件具有快速的自密封机制以防止损坏时的损失。几种收集技术已经出现，但目前还没有一种方法或一组方法提供了一个完整的，无伪象的易位韧皮部液位测量方法。在这里，我们简要描述替代技术，然后详细描述我们的方法，收集韧皮部分泌物到含有低浓度乙二胺四乙酸（EDTA）的溶液中，然后用[14 ...
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| Assessing Long-distance Transport from Photosynthetic Source Leaves to Heterotrophic Sink Organs with [14C]CO2
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Phloem loading and transport of photoassimilate from photoautotrophic source leaves to heterotrophic sink organs are essential physiological processes that help the disparate organs of a plant function as a single, unified organism. We present three protocols we routinely use in combination with each other to assess (1) the relative rates of sucrose (Suc) loading into the phloem vascular system of mature leaves (Yadav et al., 2017a), (2) the relative rates of carbon loading and transport through the phloem (Yadav et al., 2017b), and (3) the relative rates of carbon unloading into heterotrophic sink organs, specifically roots, after long-distance transport (this protocol). We propose that conducting all three protocols on experimental and control plants provides a ...
[摘要] 来自光合自养源的光合同化物的韧皮部装载和运输到异养宿主器官是必不可少的生理过程，其帮助植物的不同器官作为单一的统一生物体起作用。我们提出了三种方案，我们经常使用它们相互结合来评估（1）蔗糖（Suc）加载到成熟叶片的韧皮部血管系统中的相对比率（Yadav等人，2017a）， （2）通过韧皮部的碳载量和运输的相对速率（Yadav等人，2017b），和（3）碳长期释放到异养池器官特别是根中的相对速率距离传输（这个协议）。我们建议，在实验和对照植物上进行所有三种方案提供了全植物碳分配的可靠比较，并且将与单独进行的单一方案相关联的歧义降至最低（Dasgupta等人，2014; Khadilkar 。，2016）。在该方案中，在源叶片和韧皮部装载和运输14 C标签到异养宿主器官中，[14 C] CO 2 2被光致同化，尤其是根，通过闪烁计数进行量化。使用该协议，我们证明在拟南芥的伴侣细胞中蔗糖转运蛋白和液泡质子泵激焦磷酸酶的过表达增强了14 C标记光合同化物向宿主器官的转运（Dasgupta <等人，2014; Khadilkar等人，2016）。这种方法可以适用于量化其他植物物种的长途运输。
【背景】通过从自养源器官到异养池的韧皮部的长途运输是植物生长和产量的基础。根据其在植物中的作用和位置及其在该地区的主要功能，韧皮部网络通常分为收集韧皮部，运输韧皮部和释放韧皮部（Ayre，2011）。收集韧皮部是糖和其他化合物装入韧皮部以准备运输的地方。在已建立的植物中，收集韧皮部是发生韧皮部负载的成熟，光自养叶子的小脉。我们的第一个伴侣协议（Yadav ...
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| Transwell Co-culture of Bone Marrow Macrophages with Tumor Cells
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Author:
Date:
2014-05-05
[Abstract] Bone is a primary site of metastasis from prostate and breast cancers. Bone marrow macrophages (BMMs) are mediators of inflammatory processes and are thought to promote tumor growth in the skeletal sites. In order to elucidate how their interactions with tumor cells impact aggressiveness of metastatic tumors in bone in vitro methods are required. By employing a system in which BMMs and tumor cells are grown separately, yet share the media and exchange soluble factors, contribution of each cell type in the context of BMM-tumor cell relationship in the bone marrow can be investigated. Additional advantages of this system include the ability to study: 1) phenotypic changes in BMMs and tumor cells upon co-culture; 2) cell-specific modulation of protein and gene expression; and 3) ...
[摘要] 骨是来自前列腺和乳腺癌的原发转移部位。骨髓巨噬细胞（BMM）是炎症过程的介质，并且被认为促进骨骼部位中的肿瘤生长。为了阐明它们与肿瘤细胞的相互作用如何影响骨髓中转移性肿瘤的侵袭性，需要体外方法。通过采用其中BMM和肿瘤细胞分开生长，但共享培养基和交换可溶性因子的系统，可以研究在骨髓中BMM-肿瘤细胞关系的上下文中每种细胞类型的贡献。该系统的另外的优点包括研究以下的能力：1）共培养时BMM和肿瘤细胞中的表型改变; 2）蛋白质和基因表达的细胞特异性调节;和3）对增殖和细胞存活的影响。值得注意的是，该transwell共培养系统不限于BMM和肿瘤细胞，并且可以容易地修饰以包括骨髓微环境的其他组分（例如，脂肪细胞，基质细胞，成骨细胞）。
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