| Conditional Knockdown of Proteins Using Auxin-inducible Degron (AID) Fusions in Toxoplasma gondii
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] Toxoplasma gondii is a member of the deadly phylum of protozoan parasites called Apicomplexa. As a model apicomplexan, there is a great wealth of information regarding T. gondii’s 8,000+ protein coding genes including sequence variation, expression, and relative contribution to parasite fitness. However, new tools are needed to functionally investigate hundreds of putative essential protein coding genes. Accordingly, we recently implemented the auxin-inducible degron (AID) system for studying essential proteins in T. gondii. Here we provide a step-by-step protocol for examining protein function in T. gondii using the AID system in a tissue culture setting.
[摘要] 弓形虫是原生动物寄生虫称为Apicomplexa致命门的一员。 作为一个复杂的模型，关于T的信息有很多。 gondii的8,000多种蛋白质编码基因，包括序列变异，表达和对寄生虫适应的相对贡献。 然而，需要新的工具来功能性地调查数百个推定的必需蛋白质编码基因。 因此，我们最近实施了生长素诱导降解（AID）系统来研究T中的基本蛋白质。弓形虫。 在这里，我们提供了一个检查蛋白质功能的一步一步的协议。 在组织培养环境中使用AID系统。
【背景】生长素是一类通过靶向某些蛋白质在植物中进行蛋白酶体降解而发出信号的植物激素（Teale等人，2006）。 Kohei Nishimura等人具有将该植物特异性信号传导系统的组分转移到其他真核生物中用于有兴趣的蛋白质（POI）的条件调节，创建生长素诱导降解（AID）系统的聪明想法（Nishimura等人，2009）。这个系统已经被成功地用于几种真核生物，包括疟原虫疟原虫（Kreidenweiss et al。，2013; Philip和Waters，2015）。只需要两个转基因成分来实现这个系统，称为转运抑制剂反应1（TIR1）的植物生长素受体和用AID标记的POI。用生长素（例如，3-吲哚乙酸/ IAA）处理活化SCF ...
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| Real-time Analysis of Auxin Response, Cell Wall pH and Elongation in Arabidopsis thaliana Hypocotyls
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Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract] The rapid auxin-triggered growth of the Arabidopsis hypocotyls involves the nuclear TIR1/AFB-Aux/IAA signaling and is accompanied by acidification of the apoplast and cell walls (Fendrych et al., 2016). Here, we describe in detail the method for analysis of the elongation and the TIR1/AFB-Aux/IAA-dependent auxin response in hypocotyl segments as well as the determination of relative values of the cell wall pH.
[摘要] 拟南芥下胚轴的快速生长素触发的生长涉及核TIR1 / AFB-Aux / IAA信号传导并伴随质外体和细胞壁的酸化（Fendrych 等，2016）。 在这里，我们详细描述了在下胚轴节段中的延伸和TIR1 / AFB-Aux / IAA依赖性生长素响应的分析方法以及细胞壁pH的相对值的确定。
【背景】植物激素生长素诱导拟南芥下胚轴的快速生长。 这个过程需要TIR1 / AFB-Aux / IAA生长素共同受体。 生长素促进TIR1 / AFB和Aux / IAA的结合，导致后者的泛素化和降解，并导致生长素应答基因的转录。 这个协议的重点是测量拟南芥下胚轴的生长，生长素信号和细胞壁酸化。 该协议是基于以前Schenck等人的工作，2010年，Takahashi等人，2012年，Fraas 等人，2014年 和Spartz 等。，2014; 但与已发表的工作不同，我们描述了能够测量下胚轴生长期间发生的更大范围过程的程序; 从肉眼可见的器官伸长，通过共焦显微镜监测的细胞壁pH到通过荧光素酶生物发光显现的实时核生长素信号传导。
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| Shoot Regenerative Capacity Assays in Arabidopsis and Tobacco
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Author:
Date:
2016-03-05
[Abstract] Plant regeneration refers to a process through which an explant is differentiated to a whole plant under certain conditions. It has been shown that two plant hormones, auxin and cytokinin, play critical roles within this process (Duclercq et al., 2011). Cytokinin induces shoot regeneration, whereas auxin promotes root production. In addition to hormones, recent study has revealed that age cue serves as a common element behind plant cell totipotency (Toledano et al., 2012). Here we present an easy protocol to assess the shoot regenerative capacity of Arabidopsis and tobacco leaves of different ages.
[摘要] 植物再生是指在某些条件下外植体分化成整株植物的过程。 已经表明，两种植物激素，植物生长素和细胞分裂素在该过程中起关键作用（Duclercq等人，2011）。 细胞分裂素诱导芽再生，而生长素促进根生产。 除了激素，最近的研究已经揭示年龄提示作为植物细胞全能性背后的共同元素（Toledano等人，2012）。 在这里我们提出了一个简单的协议，以评估不同年龄的拟南芥和烟草叶的射线再生能力。
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