| Gliding Assay to Analyze Microtubule-based Motor Protein Dynamics
|
|
Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] The purpose of this protocol is to provide an updated method of performing microtubule gliding assays and visualizing it using fluorescence microscopy.
[摘要] 该协议的目的是提供一种更新的微管滑翔测定方法，并使用荧光显微镜对其进行可视化。
有丝分裂主轴是主导有丝分裂的蛋白质机械。有丝分裂纺锤体利用基于微管的运动蛋白来组织自身，并施加力量驱动细胞分裂。基于微管的运动蛋白使用源自ATP水解的能量产生机械工作（Coppin等人，1997）。运动蛋白以单向方式转移微管。运动的行为可以通过体外滑行测定（Tao和Scholey，2010）来观察，其中将电机固定在玻璃表面上并提供微管和ATP。然后可以使用荧光显微镜研究运动蛋白的运动性，并且可以实时观察其动态行为的细节。该更新的方案将允许使用体外微管滑动测定法（Tao等人，2006和2016）分析基于微管的运动蛋白功能。
|
|
|
| Extraction, Purification and Quantification of Diffusible Signal Factor Family Quorum-sensing Signal Molecules in Xanthomonas oryzae pv. oryzae
|
|
Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Bacteria use quorum-sensing (QS) systems to monitor and regulate their population density. Bacterial QS involves small molecules that act as signals for bacterial communication. Many Gram-negative bacterial pathogens use a class of widely conserved molecules, called diffusible signal factor (DSF) family QS signals. The measurement of DSF family signal molecules is essential for understanding DSF metabolic pathways, signaling networks, as well as regulatory roles. Here, we describe a method for the extraction of DSF family signal molecules from Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) cell pellets and Xoo culture supernatant. We determined the levels of DSF family signals using ultra-performance liquid chromatographic system (UPLC) coupled with accurate mass ...
[摘要] 细菌使用群体感知（QS）系统监测和调节其人口密度。细菌QS涉及作为细菌通信信号的小分子。许多革兰氏阴性细菌病原体使用一类广泛保守的分子，称为扩散信号因子（DSF）家族QS信号。 DSF家族信号分子的测量对于了解DSF代谢途径，信号网络以及调节作用至关重要。在这里，我们描述了从Xanthomonas oryzae pv提取DSF家族信号分子的方法。 （ Xoo ）细胞沉淀和Xoo 培养上清液。我们使用超高效液相色谱系统（UPLC）与准确的质量飞行时间质谱仪（TOF-MS）联合测定DSF家族信号的水平。在UPLC / MS系统的帮助下，DSF的检测限低至1μM，大大提高了在细菌培养和反应混合物中检测DSF DSF家族信号分子的能力。
背景 黄单胞菌属 oryzae pv。米糠X ae））））））））））y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y十二碳烯酸（DSF），顺式-2-十二碳烯酸（BDSF），顺式-10-甲基-2-十二碳烯酸（IDSF）和顺式<顺式 -11-甲基十二烷-2,5-二烯酸（CDSF），以调节毒力因子产生（图1）。 DSF家族信号的生物合成，感知和周转需要Xoo 中的rpf ...
|
|
|
| Measurement of Haemolysin Activities in Vibrio vulnificus
|
|
Author:
Date:
2014-03-05
[Abstract] VvhA produced by Vibrio vulnificus exhibits cytolytic activity to human cells including erythrocytes. Since haemolysis by VvhA may provide iron for bacterial growth and pathogenicity, we investigated the expression of VvhA to elucidate the regulatory roles of Fur, a major transcription factor controlling iron-homeostasis. Fur repressed the transcription of vvhBA operon via binding to the promoter region. However, haemolysin content and haemolytic activity were lowered in cell-free supernatant of fur mutant. This discrepancy between the levels of vvhA transcript and VvhA protein in fur mutant was caused by exoproteolytic activities of the elastase VvpE and another metalloprotease VvpM, which were also regulated by Fur. vvpE gene ...
[摘要] 由创伤弧菌产生的VvhA对包括红细胞在内的人类细胞表现出溶细胞活性。由于VvhA溶血可能为细菌生长和致病性提供铁，我们调查VvhA的表达以阐明毛皮，控制铁稳态的主要转录因子的调节作用。 Fur通过结合启动子区抑制 vvhBA 操纵子的转录。然而，在毛发突变体的无细胞上清液中溶血素含量和溶血活性降低。在毛皮突变体中vvhA 转录物和VvhA蛋白水平之间的这种差异是由弹性蛋白酶VvpE和另一种也受Fur调节的金属蛋白酶VvpM的外蛋白水解活性引起的。 vvpE基因表达被Fur通过结合到Fur盒同源区域而被抑制。 Fur的VvpM表达的调节不发生在vvpM 转录水平。 体外蛋白水解测定显示两种蛋白酶均有效地降解VvhA。此外，在vvpE 或vvpM 突变体的培养物上清液中的VvhA的细胞外水平高于野生型。因此，该研究表明，Fur通过调节两种VvhA降解外切蛋白酶VvpE和VvpM的表达，在vvhBA操纵子的转录水平和翻译后水平调节溶血素的产生。
此协议可应用于具有溶血素活性的其他弧菌病毒株，例如副溶血弧菌（<副溶血性弧菌）（<副溶血性弧菌）或具有类似溶血素溶素活性的其他人类病原体菌株。
|
|
|