| A Lentiviral Pseudotype ELLA for the Measurement of Antibodies Against Influenza Neuraminidase
|
|
Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] This protocol describes the rapid and safe production of lentiviral pseudotypes characterized by a lentiviral core containing a reporter, in conjunction with avian influenza haemagglutinin (HA) and human neuraminidase (NA) glycoproteins on the surface. Production is optimized with Endofectin LentiTM transfection reagent in 6-well plate format. These pseudotyped viruses can be employed for serological assays of surface glycoproteins HA and NA. They can be efficiently used to perform the ELLA (Enzyme-linked lectin assay) to measure NA inhibiting antibodies in lieu of using reassortant virus or Triton X-100 inactivated wild-type virus as source of antigen, which may require higher biosafety levels.
[摘要] 该方案描述了慢病毒假型的快速和安全生产，其特征在于含有报道分子的慢病毒核心，以及表面上的禽流感血凝素（HA）和人神经氨酸酶（NA）糖蛋白。 使用6孔板形式的Endofectin Lenti TM 转染试剂优化生产。 这些假型病毒可用于表面糖蛋白HA和NA的血清学测定。 它们可以有效地用于进行ELLA（酶联凝集素测定）以测量NA抑制抗体，而不是使用重配病毒或Triton X-100灭活的野生型病毒作为抗原来源，这可能需要更高的生物安全水平。
【背景】流感病毒假型的产生先前已被广泛描述（Nefkens et al。，2007; Temperton et al。，2007; Carnell et al。，2015）。需要一种安全快速的系统来评估通过ELLA测定靶向NA的抗体，避免使用重配错配病毒或野生型病毒，这已经通过产生携带NA型流感假型来满足（Prevato et al。，2015）。最近的一项研究（Biuso et al。，2017）证实HA与NA的共表达改善了新形成的假型慢病毒的释放。在这里，我们报告了一种简单，广泛适用和优化的PV生产方案，使用6孔板格式的Endofectin Lenti TM ...
|
|
|
| Extraction and Identification of T Cell Stimulatory Self-lipid Antigens
|
|
Author:
Date:
2015-06-05
[Abstract] Autoreactive T cells restricted to CD1 molecules and specific for endogenous lipids are abundant in human blood (de Jong et al., 2010; de Lalla et al., 2011). A few self-lipid molecules recognized by diverse individual T cell clones and accumulated within APCs following stress signals or cell transformation have been identified so far (de Jong et al., 2010; Chang et al., 2008; Lepore et al., 2014). These findings suggested that auto-reactive CD1-restricted T cells display broad lipid specificities and may play critical roles in different types of immune responses including cancer immune surveillance, autoimmunity and antimicrobial immunity. Therefore, the identification of the repertoire of self-lipid molecules recognized by T cells is ...
[摘要] 限于CD1分子并且对内源性脂质特异的自身反应性T细胞在人血液中是丰富的（de Jong等人，2010; de Lalla等人，2011）。迄今已经鉴定了多种单个T细胞克隆识别并在应激信号或细胞转化后在APC内积累的一些自身脂质分子（de Jong等人，2010; Chang等人。，2008; Lepore ，2014）。这些研究结果表明自反应CD1限制性T细胞显示广泛的脂质特异性，可能在不同类型的免疫反应，包括癌症免疫监视，自身免疫和抗微生物免疫中发挥关键作用。因此，鉴定由T细胞识别的自身脂质分子的所有组成成分对于研究该T细胞群的生理功能和评估其治疗潜力是重要的（Lepore等人，2014）。这里我们描述了我们建立的用于分离和鉴定源自白血病细胞的内源性脂质的方案，其刺激特异性自身反应性CD1c限制性T淋巴细胞（Lepore等人，2014）。该方案可以应用于从任何类型的靶细胞分离脂质抗原，并研究限制于所有CD1同种型的自身反应性T细胞的自身脂质抗原特异性（Facciotti等人，2012）。
|
|
|
| Measurement of Cytokines
|
|
Author:
Date:
2012-11-20
[Abstract] This protocol allows to measure the levels cytokines - such as VEGFs, CXCLs cytokines, PDGF or FGF - from fresh samples but also frozen tumors. The advantage of this method is to use very few micrograms of biological material and the protocol is carried out quickly.
[摘要] 该方案允许测量来自新鲜样品而且冷冻肿瘤的细胞因子如VEGF，CXCLs细胞因子，PDGF或FGF的水平。 该方法的优点是使用非常少的微克生物材料，并且该方案快速进行。
|
|
|