| A Streamlined Method for the Preparation of Gelatin Embedded Brains and Simplified Organization of Sections for Serial Reconstructions
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Gelatin embedding of whole brains for sectioning is a critical procedure used in neuroscience to ensure all morphological and spatial details are preserved intact. Here, we describe an inexpensive, reproducible and efficient means to embed post-fixed brains ready for sectioning in gelatin within a week’s time. The sections obtained are distortion-free and their fragile internal structures preserved which can be used for serial reconstructions for lesion studies and mapping of viral expression after stereotaxic injections. In addition, the separation of adjacent slices into a series of 3-4 vials facilitates subsequent organization and assembly of serial sections at the mounting step.
[摘要] 整个脑切片明胶嵌入是神经科学中使用的关键程序，以确保所有的形态和空间的细节保存完好。 在这里，我们描述了一个廉价，可重复和有效的方法来嵌入后固定的大脑准备切片明胶一个星期的时间。 获得的部分是无畸变的，它们的脆弱内部结构被保留下来，可用于系列重建病变研究和立体定位注射后的病毒表达图谱。 此外，将相邻切片分离成3-4个小瓶系列便于在安装步骤中对连续切片进行组织和组装。
【背景】行为神经科学的最新进展已经允许将视蛋白和抗体靶向毒素引入特定亚群的神经元和大脑区域。这些研究通常需要全脑切片的可视化用于组织学和形态学分析，以通过用于行为验证的立体定位注射（Aoki等，，2015）或引言定位细胞类型特异性抗体靶向毒素诱导的损伤的病毒递送转基因（Aquili等人，2014）。利用狂犬病病毒（Suzuki等人，2012）对神经元回路进行了详细的绘图，并且使用明胶作为包埋剂实现了连续切片的定位调查，所述包埋剂作为组织内和周围的结构基质。明胶浸渍的脑组织提供了加强的支持精致的内部结构，如海马和脑室空间，这是容易损坏免疫组织化学（IHC）处理和随后安装到幻灯片上。嵌入式脑切片在安装时通常也不会变形，并且可以将相邻切片用于连续重建。
凝胶嵌入和IHC处理后的质量取决于几个程序性的细节，这可能是乏味和耗时的。在先前公开的方案中，明胶向脑和心室空间的适当渗透和渗透需要真空烘箱（Griffioen等，1992）。此外，将大脑嵌入小模具中是具有挑战性的，因为大脑具有漂浮的趋势。另外，在连续重构的IHC处理之后识别和定向相邻切片可能是艰巨的。 ...
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| Qualitative and Quantitative Assay for Detection of Circulating Autoantibodies against Human Aortic Antigen
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Increased amount of autoantibodies in human sera are the hallmark of autoimmune diseases (Wang et al., 2015). In case of known antigen, detection of autoantibodies is done using laboratory based methods. However, in most autoimmune diseases, knowledge of self-antigen is still vague. We have developed an ELISA-based quantitative assay to detect the presence of autoantibodies as well as to measure the circulating autoantibodies in the sera of patients suffering from large vessel vasculitis (LVV), an autoimmune disease (Chakravarti et al., 2015). Using this assay, we detected the increase in anti-aortic antibodies in LVV patient’s sera. We have further verified the results by independent biochemical techniques and found the specificity to be > 94% (Chakravarti et al. ...
[摘要] 人血清中自身抗体量的增加是自身免疫性疾病的标志（Wang等人，2015）。 在已知抗原的情况下，使用基于实验室的方法检测自身抗体。 然而，在大多数自身免疫性疾病中，自身抗原的知识仍然是模糊的。 我们已经开发了基于ELISA的定量测定法来检测自身抗体的存在以及测量患有大血管血管炎（LVV），自身免疫疾病（Chakravarti等人）的患者的血清中的循环自身抗体， ，2015）。 使用该测定，我们检测到LVV患者血清中抗主动脉抗体的增加。 我们通过独立生物化学技术进一步验证了结果，发现特异度 94％（Chakravarti等人，2015）。 该方法可以被独特地修改以适应任何自身免疫，特别是器官特异性疾病，因此在自身抗体的检测和定量中具有更广泛的应用。
【背景】约有80-100种自身免疫性疾病，其中免疫细胞将自身蛋白识别为外源抗原，并被激活以产生体液应答。尽管大多数自身免疫性疾病的触发因素仍然是一个谜，患者血清中存在较高水平的抗体是非常普遍的（Wang等人，2015）。一些实例包括抗小血管血管炎中的嗜中性粒细胞胞浆抗原，多发性硬化中的髓磷脂碱性蛋白，1型糖尿病中的谷氨酸脱羧酶等。（Wang等人， ...
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| Immunolocalization of Proteins in Corals: the V-type H+-ATPase Proton Pump
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Author:
Date:
2015-09-05
[Abstract] Here we describe the immunolocalization of a membrane-bound proton pump, the V-type H+-ATPase (VHA), in tissues and isolated cells of scleractinian corals. Immunolocalization of coral proteins requires additional steps not required for various model organisms, such as decalcification of the coral skeleton for immunohistochemistry or removal of cells away from the skeleton for immunocytochemistry. The tissue and cell preparation techniques described here can be adapted for localization of other coral proteins, provided the appropriate validation steps have been taken for the primary antibodies and species of coral used. These techniques are important for improving our understanding of coral cell physiology
[摘要] 在这里我们描述膜结合质子泵，V型H + -ATPase（VHA），在组织和分离的细胞的scleractinian珊瑚的免疫定位。 珊瑚蛋白的免疫定位需要对于各种模型生物不需要的额外步骤，例如用于免疫组织化学的珊瑚骨架的脱钙或从用于免疫细胞化学的骨架移除细胞。 本文所述的组织和细胞制备技术可适用于其它珊瑚蛋白的定位，条件是已对所用的一级抗体和珊瑚种类采取了适当的验证步骤。 这些技术对于提高我们对珊瑚细胞生理学的理解是重要的
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