| Preparation of Synaptoneurosomes to Study the Synapse in the Murine Cerebral Cortex
|
|
Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] The synapse is a complex structure where the transmission of information takes place. Synaptic dysfunction is one of the earliest pathophysiological events in several diseases, such as traumatic brain injury, cerebral ischemia, and neurodegenerative diseases. Thus, a methodology to study synaptic structure and function is crucial for the development of potential strategies for the treatment of many neurological diseases. Synaptoneurosomes (SNs) are structures assembled by the sealed presynaptic bouton and the attached post-synaptic density. Despite the fact that for a long time it has been recognized that SNs are a powerful tool to study synaptic function, composition, and structure, its use has been limited by the requirement of relatively large amounts of material to successfully ...
[摘要] [摘要]突触是一个复杂的结构，在此结构中发生信息的传递。小号ynaptic功能障碍是几种疾病，如脑外伤，脑缺血最早的病理生理活动之一，和神经退行性疾病。因此，研究突触结构和功能的方法学对于开发治疗许多神经系统疾病的潜在策略至关重要。突触神经小体（SN）是由密封的突触前钮扣和附加的突触后密度组装而成的结构。尽管很长一段时间以来，人们已经认识到SN是研究突触功能，组成的强大工具，在结构和结构上，其使用受到成功地隔离它们所需的相对大量材料的限制。在这里，我们描述了在低渗条件下执行的三步离心程序，以从少量大脑皮层中分离出SN。
图形摘要：
突触神经体的制备流程图。
[背景]突触是由连接至突触后终端和突触前布顿组装的结构所包围由星形细胞伸长率（Halassa等人，2007 ）。在过去的十年中，见证了许多用于研究其结构和功能的高度复杂的技术的发展。但是，SN仍被大量研究者所使用，因为它们相对容易分离并产生有关突触结构和功能的有价值的信息。SNs的制备是在特定的低渗条件下进行的改良的细胞分离程序，可分离突触前突突和附着的突触后元件。在鉴定的最初阶段，它们被称为无细胞响应制剂，因为它们对激素具有响应（Chasin等，197 4 ；Horn和Phillipson ，1976 ...
|
|
|
| Quantification of Colibactin-associated Genotoxicity in HeLa Cells by In Cell Western (ICW) Using γ-H2AX as a Marker
|
|
Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] The genotoxin colibactin is produced by several species of Enterobacteriaceae. This genotoxin induces DNA damage, cell cycle arrest, senescence and death in eukaryotic cells (Nougayrède et al., 2006; Taieb et al., 2016). Here we describe a method to quantify the genotoxicity of bacteria producing colibactin following a short infection of cultured mammalian cells with colibactin producing E. coli.
[摘要] 基因毒素colibactin由几种肠杆菌科产生。 该基因毒素在真核细胞中诱导DNA损伤，细胞周期停滞，衰老和死亡（Nougayrède等人，2006; Taieb等人，2016）。 在这里，我们描述了一种方法来量化生产colibactin的细菌的基因毒性，在短时间感染培养的哺乳动物细胞后，产生e colibactin。大肠杆菌。
【背景】基因毒素colibactin是由几种肠杆菌科产生的聚酮化合物非核糖体肽杂交化合物。由编码在54kb基因组基因座pks岛上的机器合成的这种毒素在真核细胞中诱导DNA损伤，细胞周期停滞，衰老和死亡（Nougayrède等人， 2006年; Taieb 等人，2016年）。大肠杆菌素的基因毒性活性取决于直接的宿主细胞 - 细菌相互作用，并且不能从培养物上清液，杀死的细菌或细菌裂解物而非生命细菌重演。可以通过量化巨细胞病表型（对于方案参见Bossuet-Greif等人，2017）或双链DNA断裂的定量来评估对真核细胞的大肠杆菌素基因毒性效应的可视化和定量在彗星试验（揭示DNA片段化）或H2AX组蛋白磷酸化作用宿主细胞核中，双链DNA标记断裂。组蛋白H2AX的磷酸化表征为对遗传毒性剂的早期和敏感反应（Audebert等人，2010）。证明H2AX磷酸化比彗星试验在体外以及体内灵敏度高10-100倍（Audebert等人， ...
|
|
|
| Qualitative and Quantitative Assay for Detection of Circulating Autoantibodies against Human Aortic Antigen
|
|
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Increased amount of autoantibodies in human sera are the hallmark of autoimmune diseases (Wang et al., 2015). In case of known antigen, detection of autoantibodies is done using laboratory based methods. However, in most autoimmune diseases, knowledge of self-antigen is still vague. We have developed an ELISA-based quantitative assay to detect the presence of autoantibodies as well as to measure the circulating autoantibodies in the sera of patients suffering from large vessel vasculitis (LVV), an autoimmune disease (Chakravarti et al., 2015). Using this assay, we detected the increase in anti-aortic antibodies in LVV patient’s sera. We have further verified the results by independent biochemical techniques and found the specificity to be > 94% (Chakravarti et al. ...
[摘要] 人血清中自身抗体量的增加是自身免疫性疾病的标志（Wang等人，2015）。 在已知抗原的情况下，使用基于实验室的方法检测自身抗体。 然而，在大多数自身免疫性疾病中，自身抗原的知识仍然是模糊的。 我们已经开发了基于ELISA的定量测定法来检测自身抗体的存在以及测量患有大血管血管炎（LVV），自身免疫疾病（Chakravarti等人）的患者的血清中的循环自身抗体， ，2015）。 使用该测定，我们检测到LVV患者血清中抗主动脉抗体的增加。 我们通过独立生物化学技术进一步验证了结果，发现特异度 94％（Chakravarti等人，2015）。 该方法可以被独特地修改以适应任何自身免疫，特别是器官特异性疾病，因此在自身抗体的检测和定量中具有更广泛的应用。
【背景】约有80-100种自身免疫性疾病，其中免疫细胞将自身蛋白识别为外源抗原，并被激活以产生体液应答。尽管大多数自身免疫性疾病的触发因素仍然是一个谜，患者血清中存在较高水平的抗体是非常普遍的（Wang等人，2015）。一些实例包括抗小血管血管炎中的嗜中性粒细胞胞浆抗原，多发性硬化中的髓磷脂碱性蛋白，1型糖尿病中的谷氨酸脱羧酶等。（Wang等人， ...
|
|
|