Platelet Migration and Bacterial Trapping Assay under Flow
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Date:
2018-09-20
[Abstract] Blood platelets are critical for hemostasis and thrombosis, but also play diverse roles during immune responses. We have recently reported that platelets migrate at sites of infection in vitro and in vivo. Importantly, platelets use their ability to migrate to collect and bundle fibrin (ogen)-bound bacteria accomplishing efficient intravascular bacterial trapping. Here, we describe a method that allows analyzing platelet migration in vitro, focusing on their ability to collect bacteria and trap bacteria under flow.
[摘要] 血小板对于止血和血栓形成至关重要,但在免疫反应中也起着不同的作用。 我们最近报道了血小板在体外体外和体内感染部位迁移。 重要的是,血小板利用它们迁移的能力来收集和捆绑纤维蛋白(ogen)结合的细菌,从而实现有效的血管内细菌捕获。 在这里,我们描述了一种方法,允许分析血小板在体外的迁移,重点是它们收集细菌和捕获流动细菌的能力。
【背景】血小板是从巨核细胞释放的小的无核细胞片段,其存在于哺乳动物生物的骨髓内(Machlus和Italiano,2013)。大约7500亿血小板在人体血液中循环,不断扫描脉管系统以破坏内皮表面。在遇到内皮损伤时,血小板立即被招募在充分表征的事件级联中,包括初始血小板束缚和滚动,然后是血小板活化,粘附和扩散,最终导致纤维蛋白(ogen)依赖性聚集和随后的血栓收缩(Jackson, 2007)。血小板栓塞形成是生理性止血的主要步骤,但也是动脉粥样硬化斑块破裂后的病理性血栓形成,触发心肌梗塞或中风(Jackson,2011)。
除了在止血和血栓形成中的公认作用外,血小板还发展出多种免疫功能(Semple et al。,2011)。作为第一批招募炎症和感染部位的细胞,血小板在启动血管内免疫反应中起着重要作用(Wong et ...
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Tracking Lipid Transfer by Fatty Acid Isotopolog Profiling from Host Plants to Arbuscular Mycorrhiza Fungi
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Date:
2018-04-05
[Abstract] Lipid transfer from host plants to arbuscular mycorrhiza fungi was hypothesized for several years because sequenced arbuscular mycorrhiza fungal genomes lack genes encoding cytosolic fatty acid synthase (Wewer et al., 2014; Rich et al., 2017). It was finally shown by two independent experimental approaches (Jiang et al., 2017; Keymer et al., 2017; Luginbuehl et al., 2017). One approach used a technique called isotopolog profiling (Keymer et al., 2017). Isotopologs are molecules, which differ only in their isotopic composition. For isotopolog profiling an organism is fed with a heavy isotope labelled precursor metabolite. Subsequently, the labelled isotopolog composition of metabolic products is analysed via mass spectrometry. The ...
[摘要] 因为测序的丛枝菌根真菌基因组缺乏编码胞质脂肪酸合酶的基因(Wewer等人,2014; Rich等人,2014),因此假定脂质从宿主植物转移到丛枝菌根真菌数年。 / em>,2017)。最终通过两种独立的实验方法(Jiang等人,2017; Keymer等人,2017; Luginbuehl等人, ), 2017年)。一种方法使用称为同位素体谱分析的技术(Keymer等人,2017)。同位素体是分子,它们的同位素组成不同。对于同位素生物学分析,生物体被喂以重同位素标记的前体代谢物。随后,通过质谱分析代谢产物的标记同位素组成。检测到的目标代谢物的同位素体模式产生关于代谢途径和通量的信息(Ahmed et al。,2014)。以下协议描述了一个实验装置,该装置能够在由丛枝菌根真菌及其相关真菌胞外菌丝体定植的植物根中分离出脂肪酸的单独同位素分布图,以阐明两种共生生物之间的通量。我们预测,如果两种相互作用的生物体可以物理分离,则该策略还可以用于研究其他生物体之间的代谢物通量。
【背景】丛枝菌根真菌是生物营养生物。因此,它们不能独立栽培,而是依靠与寄主植物的相互作用来维持生命并完成它们的生命周期。这一特征使得研究两种共生生物,特别是单独的真菌具有挑战性。
为了培养,处理和收获与宿主根分开的真菌,开发了2室培养皿系统,并将其用于以前工作中的标记研究(Bécard和Fortin,1988; ...
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TUNEL Assay to Assess Extent of DNA Fragmentation and Programmed Cell Death in Root Cells under Various Stress Conditions
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2017-08-20
[Abstract] DNA damage is one of the common consequences of exposure to various stress conditions. Different methods have been developed to accurately assess DNA damage and fragmentation in cells and tissues exposed to different stress agents. However, owing to the presence of firm cellulosic cell wall and phenolics, plant cells and tissues are not easily amenable to be subjected to these assays. Here, we describe an optimized TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling) assay-based protocol to determine the extent of DNA fragmentation and programmed cell death in plant root cells subjected to various stress conditions. The method described here has the advantages of simplicity, reliability and reproducibility.
[摘要] DNA损伤是暴露于各种压力条件的常见后果之一。 已经开发了不同的方法来准确评估暴露于不同应激剂的细胞和组织中的DNA损伤和碎裂。 然而,由于纤维素细胞壁和酚类物质的存在,植物细胞和组织不容易进行这些测定。 在这里,我们描述了优化的TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口标记)测定方法,以确定经受各种应激条件的植物根细胞中DNA片段化和程序性细胞死亡的程度。 这里描述的方法具有简单,可靠和重复性好的优点。 【背景】暴露于各种压力通常导致至少一定程度的DNA损伤,导致各种损伤,例如胸腺嘧啶二聚化,碱基烷基化,单链缺口和双链断裂(Bray和West,2005; Manova和Gruszka,2015)。在所有类型的DNA损伤中,DNA片段化在应激条件下特别令人关注,这可能是应激的直接影响(如用基因毒素治疗方法所观察到的)或间接作用(主要是通过过度产生的活性氧),甚至可能是两者的累积结果(Bray和West,2005; Kapoor等,2015)。这种DNA损伤必须由细胞的修复机械精确修复,否则可能会导致细胞死亡。为了维持正常状态,细胞利用依赖于三个非排他事件的DNA损伤反应。检测/识别损坏,其通过维修机械的访问,最后修复(Smerdon,1991)。 在细胞水平上应力适应的主要分子机制之一涉及对由于应激引起的受损DNA的DNA损伤和/或有效修复的抗性。因此,为了评估基因型的应激适应性,通常需要对DNA损伤进行准确评估。两种广泛用于检测植物DNA断裂的测定法是单细胞凝胶电泳 ...
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