| Isolation of Tumor Cells Based on Their Distance from Blood Vessels
|
|
Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Differential exposure of tumor cells to microenvironmental cues greatly impacts cell phenotypes, raising a need for position based sorting of tumor cells amenable to multiple OMICs and functional analyses. One such key determinant of tumor heterogeneity in solid tumors is its vasculature. Proximity to blood vessels (BVs) profoundly affects tumor cell phenotypes due to differential availability of oxygen, gradient exposure to blood-borne substances and inputs by angiocrine factors. To unravel the whole spectrum of genes, pathways and phenotypes impacted by BVs and to determine spatial domains of vascular influences, we developed a methodology for sorting tumor cells according to their relative distance from BVs. The procedure exemplified here using glioblastoma (GBM) model is based on ...
[摘要] [摘要 ] 肿瘤细胞的差分暴露于微环境线索大大IM 协议小号细胞表型，提高基于需要位置的肿瘤细胞的分选适合于多个组学和功能分析。实体瘤中肿瘤异质性的此类关键决定因素之一是其脉管系统。邻近血管（的BV）深刻affec TS 肿瘤细胞表型是由于氧气的可利用性不同，对血源性物质的梯度暴露以及血管分泌因子的输入所致。为了揭示受BV影响的基因，通路和表型的整个谱图，并确定血管影响的空间域，我们开发了一种根据肿瘤细胞与BV的相对距离进行分类的方法。此处使用胶质母细胞瘤（GBM）模型示例的程序基于静脉内注射，自由扩散的荧光染料的差异摄取，该染料允许分离位于适合于后续OMIC和功能分析的不同连续微环境中的无基质肿瘤细胞。这种可靠，易于使用，具有成本效益的策略可以扩展到所有实体瘤，以研究脉管系统的影响或缺乏脉管系统的影响。
[背景 ] 在充足的血液供应肿瘤依赖已经提供了一种用于抗血管生成的癌症治疗的理由（Carmeliet和耆那，2000; Vasudev 等人，2013年）。传统上归因于氧气和其他血源性物质的提供，肿瘤脉管系统在肿瘤生物学中的作用最近扩展到包括由分泌的内皮产生的血管分泌因子施加的非灌注依赖性旁分泌输入（Butler 等人，2010； Beck 等人，2011； Lu 等人，2013），以及通过相互Notch信号传导介导的肿瘤-BV直接接触（Cao ...
|
|
|
| [2-3H]Mannose-labeling and Analysis of N-linked Oligosaccharides
|
|
Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Modifications of N-linked oligosaccharides of glycoproteins soon after their biosynthesis correlate to glycoprotein folding status. These alterations can be detected in a sensitive way by pulse-chase analysis of [2-3H]mannose-labeled glycoproteins, with enzymatic removal of labeled N-glycans, separation according to size by HPLC and radioactive detection in a scintillation counter.
[摘要] 其生物合成后不久，糖蛋白的N-连接寡糖的修饰与糖蛋白折叠状态相关。 可以通过脉冲追踪分析[2- 3 H]甘露糖标记的糖蛋白，通过酶切除标记的N-聚糖来检测这些变化，根据大小通过HPLC分离和放射性 在闪烁计数器中检测。
【背景】在将新生多肽进入ER后，进行若干翻译后修饰，这对于折叠，成熟和质量控制过程至关重要。加入核糖寡糖Glc 3 N 3 GlcNAc 2以产生N-连接的糖蛋白是非常常见的修饰，首先发生（Benyair等人，2011）。前体N-聚糖的加工通过在早期分泌室（Tannous等人，2015）中创建识别标签来引导糖蛋白成熟和质量控制机制。在后期阶段，在整个分泌途径中，寡糖的核心作为将糖链扩展成复合聚糖的平台，其结构涉及糖蛋白的运输和功能（Kamiya等人， ，2012）。由于早期N-连接的聚糖修饰反映糖蛋白生物合成和质量控制，寡糖加工已成为许多研究的主题（Avezov等人，2010; Hosokawa等人。，2010; Ninagawa等人，2014; Ogen-Shtern等人，2016）。糖蛋白组学方法大大改善了N-聚糖的表征，但它们不允许研究早期分泌途径中聚糖加工的动力学。
＆NBSP;这里我们描述一种用于分离和分析代谢标记的N-连接寡糖的简化脉冲追踪方法。该方法包括通过[2- H] ...
|
|
|
| Aorta Ring Assay
|
|
Author:
Date:
2016-07-05
[Abstract] Angiogenesis is the nature and pathological process of blood vessel growth from pre-existing vascular buds. It plays an important role in cancer and cardiovascular disease. The aorta ring assay is an approach to study angiogenesis. In this experiment, we used the aorta of rat as the study material, cleaned the surrounding tissue of aorta and cut it into 1 mm long rings. Next, the rings were cultured in growth factor-reduced matrigel polymerized at 37 °C. Angiogenesis was assessed at 7 days by using an inverted microscope platform.
[摘要] 血管生成是来自预先存在的血管芽的血管生长的性质和病理过程。 它在癌症和心血管疾病中起重要作用。 主动脉环测定是血管生成的一种方法。 在这个实验中，我们使用大鼠主动脉作为材料，清洁主动脉的周围组织，并将其切成1 mm长的环。 然后将环在37℃下聚合的生长因子减少的基质胶中培养。 通过使用倒置显微镜平台在7天评估血管发生。
|
|
|