| Primary Neuron-glia Culture from Rat Cortex as a Model to Study Neuroinflammation in CNS Injuries or Diseases
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Author:
Date:
2016-04-20
[Abstract] Primary neuron-glia cultures are commonly used in vitro model for neurobiological studies. Here, we provide a protocol for the isolation and culture of neuron-glial cells from cortical tissues of 1-day-old neonatal Sprague-Dawley pups. The procedure makes available an easier way to obtain the neuron and glia. In this culture system, neuron-glia cultures consisted of approximately 37% neurons, 51% astrocytes, 7% microglia, and a small percentage (<5%) of other cells after fourteen days in vitro. Primary neuron-glia cultures is a simplified in vitro model for studies focusing on interactions between neurons and glia cells. Activated glial cells, mainly astrocytes and microglia, are histopathological hallmarks of acute injury of the central nervous system (CNS) ...
[摘要] 原代神经元 - 神经胶质培养物通常用于神经生物学研究的体外模型。在这里，我们提供的隔离和培养的神经元胶质细胞从1日龄新生儿Sprague-Dawley幼崽的皮质组织的协议。该程序提供了一种更容易的方式来获得神经元和神经胶质。在该培养系统中，神经元 - 神经胶质培养物在体外14天后由约37％神经元，51％星形胶质细胞，7％小胶质细胞和小百分比（<5％）的其他细胞组成。原代神经元胶质细胞培养物是用于研究的简化的体外模型，其关注于神经元和神经胶质细胞之间的相互作用。活化的胶质细胞，主要是星形胶质细胞和小神经胶质细胞，是中枢神经系统（cns）或慢性神经疾病的急性损伤的组织病理学标志（hirsch和hunot，2009; lee等人，2009; minghetti， 2005）。由活化神经胶质释放的炎性介质（例如一氧化氮，活性氧，促炎细胞因子和趋化因子）可直接或间接引起神经元损伤或神经变性。神经炎症是导致神经变性的各种神经疾病的常见机制。神经胶质细胞培养的优点是：（1）培养的细胞可以在体内绕过复杂的生理相互作用（例如白细胞浸润，血脑屏障，反射或其他系统调节）以允许直接观察（缺氧，缺血，创伤，感染，神经毒素，慢性应激或疾病）引起的神经炎症; （2）与主要源自肿瘤细胞的细胞系不同，原代培养的神经元 - 神经胶质系统更接近于体内细胞群体比率，并且可以模拟原位微环境;和（3）可以从各种脑区域（例如皮质，海马，中脑等）制备培养物，并且允许有机会检查对神经变性的易感性的区域差异随后由各种cns损伤引起的神经炎症（kim等人，2000）。以下方案是原代大鼠皮质神经元 - 神经胶质培养物制备的实例（huang等人，2015; huang等人，2014; huang等人。，2012; huang ，，2009）。
lee等人，2009;="" minghetti，="" 2005）。由活化神经胶质释放的炎性介质（例如一氧化氮，活性氧，促炎细胞因子和趋化因子）可直接或间接引起神经元损伤或神经变性。神经炎症是导致神经变性的各种神经疾病的常见机制。神经胶质细胞培养的优点是：（1）培养的细胞可以在体内绕过复杂的生理相互作用（例如白细胞浸润，血脑屏障，反射或其他系统调节）以允许直接观察（缺氧，缺血，创伤，感染，神经毒素，慢性应激或疾病）引起的神经炎症;="" （2）与主要源自肿瘤细胞的细胞系不同，原代培养的神经元="" -="" 神经胶质系统更接近于体内细胞群体比率，并且可以模拟原位微环境;和（3）可以从各种脑区域（例如皮质，海马，中脑等）制备培养物，并且允许有机会检查对神经变性的易感性的区域差异随后由各种cns损伤引起的神经炎症（kim等人，2000）。以下方案是原代大鼠皮质神经元="" -="" 神经胶质培养物制备的实例（huang等人，2015;="" huang等人，2014;="" huang等人。，2012;="" huang="" ，，2009）。=""> ...
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| Isolation and Culture of Human Endometrial Epithelial Cells and Stromal Fibroblasts
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Author:
Date:
2015-10-20
[Abstract] Purification and culture of endometrial epithelial cells (eEC) and stromal fibroblasts (eSF) from endometrial biopsies allows for downstream cell-specific in vitro studies. The utility of this protocol is the ease with which cells are purified without contamination from unwanted cell types, and the ability to use patient-paired eEC and eSF in experiments. These methods have been previously published, but here the protocol has been updated for maximum efficiency.
[摘要] 来自子宫内膜活检的子宫内膜上皮细胞（eEC）和基质成纤维细胞（eSF）的纯化和培养允许下游细胞特异性体外研究。 该协议的效用是细胞被净化而不受不想要的细胞类型的污染，以及在实验中使用患者配对的eEC和eSF的能力。 这些方法以前已经发布，但在这里协议已经更新为最大的效率。
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| Dictyostelium Cultivation, Transfection, Microscopy and Fractionation
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Author:
Date:
2015-06-05
[Abstract] The real time visualisation of fluorescently tagged proteins in live cells using ever more sophisticated microscopes has greatly increased our understanding of the dynamics of key proteins during fundamental physiological processes such as cell locomotion, chemotaxis, cell division and membrane trafficking. In addition the fractionation of cells and isolation of organelles or known compartments can often verify any subcellular localisation and the use of tagged proteins as bait for the immunoprecipitation of material from cell fractions can identify specific binding partners and multiprotein complexes thereby helping assign a function to the tagged protein. We have successfully applied these techniques to the Dictyostelium discoideum protein TSPOON that is part of an ancient ...
[摘要] 使用更复杂的显微镜，活细胞中荧光标记的蛋白质的实时可视化大大增加了我们对基本生理过程如细胞运动，趋化性，细胞分裂和膜运输过程中关键蛋白质动力学的了解。此外，细胞的分级和分离细胞器或已知的隔室通常可以验证任何亚细胞定位，并且使用标记的蛋白质作为诱饵用于来自细胞部分的物质的免疫沉淀可以鉴定特异性结合配偶体和多蛋白复合物，从而有助于赋予功能标记蛋白。我们已经成功地将这些技术应用于作为古代异构六聚体膜转运复合物的一部分的盘基网柄菌discoideum蛋白TSPOON（Hirst等，2013）。 ...
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