| Immuno-electrophysiology on Neuromuscular Junctions of Drosophila Third Instar Larva
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Alterations in synaptic transmission are critical early events in neuromuscular disorders. However, reliable methodologies to analyze the functional organization of the neuromuscular synapses are still needed. This manuscript provides a detailed protocol to analyze the molecular assembly of the neuromuscular synapses through immune-electrophysiology in Drosophila melanogaster. This technique allows the quantification of the molecular behavior of the neuromuscular synapses by correlating the structural configuration of the synaptic boutons with their electrical activity.
[摘要] [摘要]突触传递的改变是神经肌肉疾病的关键早期事件。但是，仍然需要可靠的方法来分析神经肌肉突触的功能组织。此马努脚本提供了详细的协议，通过在免疫电分析神经肌肉突触的分子组装果蝇黑腹果蝇。该技术通过使突触钮扣的结构构型与其电活动相关联，可以量化神经肌肉突触的分子行为。
[背景]果蝇三龄幼虫的神经肌肉接头（NMJ）的功能组织在研究突触形成和功能的分子机制方面具有突出的优势（Feiguin等，2009 ; Godena等，2011; Romano等。（2014年和2015年；Strah等人，2020年），它在包括人类在内的其他物种中似乎是保守的。在这方面，果蝇NMJs的解剖组织是由多个突触钮扣构成的，这些突触钮扣是在运动轴突的最终乔木形成的。这些结构的分化和维持负责骨骼肌的神经支配，并暗示不同分子的协调作用，专门用于建立细胞接触以及释放，接收和整合神经递质信号传导所需的机制。此外，在果蝇中开发的功能强大的遗传工具以及神经系统对单个神经元的解剖学解析，提供了难得的机会，可以在可区分细胞的组织中进行全基因组范围的分子表型无偏搜索。尽管果蝇已经存在可视化神经肌肉突触建立的单独协议（Sabeva和Bykhovskaia，2017 ; Goel等人，2019 ...
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| Testing Bone Formation Induction by Calvarial Injection Assay in vivo
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] Bone formation occurs during embryogenesis, skeletal growth and during the process of skeletal renewal throughout life. In the process of bone formation, osteoblasts lay down a collagen-containing matrix, termed osteoid, which is gradually hardened by incorporation of mineral crystals. Although osteoblasts can be induced to differentiate and to deposit mineral in culture, this system does not always provide results that reflect the ability of agents to stimulate bone formation in vivo. This protocol describes a rapid and reliable method for testing local administration of agents on bone formation in vivo. In this method, mice are injected with the agent of question for 5 successive days. Fluorochrome labels are injected prior to, and after agents used for testing, and ...
[摘要]
[摘要 ] 骨骼形成发生在胚胎发生，骨骼生长以及整个生命的骨骼更新过程中。在骨形成过程中，成骨细胞沉积了一种含胶原蛋白的基质（称为类骨质），该基质通过掺入矿物质晶体而逐渐硬化。尽管可以诱导成骨细胞分化并在培养物中沉积矿物质，但该系统并不总是提供反映试剂在体内刺激骨骼形成能力的结果。该协议描述了一种快速可靠的方法，用于测试体内局部骨形成剂的局部给药。 在这种方法中，连续5天给小鼠注射相关药物。在用于测试的试剂之前和之后注射荧光染料标记，并通过未脱钙的骨组织学和组织形态计量术收集并分析样品。这提供了一种评估试剂刺激骨形成能力的可靠方法，如果使用短期修饰，也可以用于测试骨中对相同刺激的基因反应。
[背景 ] 骨形成是为骨架的发展所需的基本过程，对于骨骼生长的进展，并保持整个生命骨结构作为骨架不断重塑。骨形成是通过三个步骤发生的过程：（1）富含胶原的类骨质沉积，（2）通过在胶原纤维周围沉积生物磷灰石晶体而发生的类骨矿化，以及（3）矿化的骨质成熟（Blank and Sims ，2019）。这三个步骤由源自共同祖细胞的两种细胞类型介导。成骨细胞沉积类骨质并开始矿化，并且随着类骨质的沉积，一些成骨细胞被包埋在骨基质内并分化为骨细胞（Dallas and Bonewald ，2010）。这些嵌入的细胞还控制骨骼矿化的程度和性质（Vrahnas 等，2019）。 ...
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| Measurement of Dopamine Using Fast Scan Cyclic Voltammetry in Rodent Brain Slices
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Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Fast scan cyclic voltammetry (FSCV) is an electrochemical technique that allows sub-second detection of oxidizable chemical species, including monoamine neurotransmitters such as dopamine, norepinephrine, and serotonin. This technique has been used to record the physiological dynamics of these neurotransmitters in brain tissue, including their rates of release and reuptake as well as the activity of neuromodulators that regulate such processes. This protocol will focus on the use of ex vivo FSCV for the detection of dopamine within the nucleus accumbens in slices obtained from rodents. We have included all necessary materials, reagents, recipes, procedures, and analyses in order to successfully perform this technique in the laboratory setting. Additionally, we have also included ...
[摘要] 快速扫描循环伏安法（FSCV）是一种电化学技术，可以亚秒检测可氧化的化学物质，包括单胺类神经递质，如多巴胺，去甲肾上腺素和血清素。 该技术已被用于记录这些神经递质在脑组织中的生理动态，包括它们的释放和再摄取速率以及调节这些过程的神经调节剂的活性。 该方案将集中于使用离体 FSCV检测从啮齿动物获得的切片中的伏隔核内的多巴胺。 我们已经包含了所有必要的材料，试剂，配方，程序和分析，以便在实验室环境中成功地执行该技术。 此外，我们还提供了一些警示点，我们认为这些警告点对于那些在该领域的新手有帮助。
【背景】由于首先将用于检查生理系统的电特性的能力用于临床前科学研究，因此已经开发了许多用于研究突触生理学的技术。从鱿鱼轴突电生理记录的早期到现在的快速扫描循环伏安法（FSCV）在人类帕金森病患者中进行（Kishida et al。，2016; Lohrenz et al。，2016），该领域在相对较短的时间内取得了重大进展。该协议的重点是FSCV，是物理学家，分析化学家和神经科学家之间40多年的创新和合作的技术成果。早在19世纪（Bard和Zoski，2000年），电化学与Michael Faraday和Alessandro Volta一起诞生（Bard and Zoski，2000），直到20世纪20年代，Jaroslav ...
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