| Histochemical Preparations to Depict the Structure of Cauliflower Leaf Hydathodes
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] Hydathodes are plant organs present on leaf margins of a wide range of vascular plants and are the sites of guttation. Both anatomy and physiology of hydathodes are poorly documented. We have recently reported on the anatomy of cauliflower and Arabidopsis thaliana hydathodes and on their infection by the vascular pathogenic bacterium Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) (Cerutti et al., 2017). Because hydathodes are natural infection routes for several pathogens, it is necessary to have a deep knowledge of their anatomy to further better interpret images of infected hydathodes. Here, we described different detailed protocols for gaining information on hydathode anatomy which are applicable to a wide range of plants (including monocots ...
[摘要] 水溶性植物是存在于各种维管植物的叶缘上的植物器官，是排列的位置。水解的解剖学和生理学都很少被证明。我们最近报道了花椰菜和拟南芥水解的解剖结构及其血管病原菌黄单胞菌（Xanthomonas campestris）pv的感染。 Cerutti等人，2017）。由于水阴是多种病原体的自然感染途径，因此需要对其解剖学有深入的了解，以进一步更好地解释受感染水合物的图像。在这里，我们描述了不同的详细方案，以获得适用于广泛植物（包括单子叶植物如大麦和水稻）的水溶性解剖学信息。用Nomarsky和共焦显微镜观察澄清的厚样品。透射光和透射电子显微镜中的光学显微镜用于观察薄和超薄切片。
【背景】在文献中，使用不同的技术来研究水溶性（Perrin，1972; Chen and Chen，2007; Wang等人，2011; Singh，2014）。 从光学显微镜（在整个组织或树脂嵌入样品的部分）到扫描或透射电子显微镜，可以使用大型方案和技术。 据我们所知，这些技术并不被组合使用，激光共焦显微镜从未用于描绘水溶性结构。 此外，我们注意到从协议到协议的变化。 我们在这里介绍了组合使用的不同技术。 它们适合花椰菜和拟南芥（Arabidopsis thaliana）。 它们已成功应用于其他植物，如单子叶植物（大麦和大米），应适用于各种植物物种。 ...
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| TUNEL Assay to Assess Extent of DNA Fragmentation and Programmed Cell Death in Root Cells under Various Stress Conditions
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] DNA damage is one of the common consequences of exposure to various stress conditions. Different methods have been developed to accurately assess DNA damage and fragmentation in cells and tissues exposed to different stress agents. However, owing to the presence of firm cellulosic cell wall and phenolics, plant cells and tissues are not easily amenable to be subjected to these assays. Here, we describe an optimized TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling) assay-based protocol to determine the extent of DNA fragmentation and programmed cell death in plant root cells subjected to various stress conditions. The method described here has the advantages of simplicity, reliability and reproducibility.
[摘要] DNA损伤是暴露于各种压力条件的常见后果之一。 已经开发了不同的方法来准确评估暴露于不同应激剂的细胞和组织中的DNA损伤和碎裂。 然而，由于纤维素细胞壁和酚类物质的存在，植物细胞和组织不容易进行这些测定。 在这里，我们描述了优化的TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口标记）测定方法，以确定经受各种应激条件的植物根细胞中DNA片段化和程序性细胞死亡的程度。 这里描述的方法具有简单，可靠和重复性好的优点。
【背景】暴露于各种压力通常导致至少一定程度的DNA损伤，导致各种损伤，例如胸腺嘧啶二聚化，碱基烷基化，单链缺口和双链断裂（Bray和West，2005; Manova和Gruszka，2015）。在所有类型的DNA损伤中，DNA片段化在应激条件下特别令人关注，这可能是应激的直接影响（如用基因毒素治疗方法所观察到的）或间接作用（主要是通过过度产生的活性氧），甚至可能是两者的累积结果（Bray和West，2005; Kapoor等，2015）。这种DNA损伤必须由细胞的修复机械精确修复，否则可能会导致细胞死亡。为了维持正常状态，细胞利用依赖于三个非排他事件的DNA损伤反应。检测/识别损坏，其通过维修机械的访问，最后修复（Smerdon，1991）。
在细胞水平上应力适应的主要分子机制之一涉及对由于应激引起的受损DNA的DNA损伤和/或有效修复的抗性。因此，为了评估基因型的应激适应性，通常需要对DNA损伤进行准确评估。两种广泛用于检测植物DNA断裂的测定法是单细胞凝胶电泳 ...
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| Rapid Profiling Cell Cycle by Flow Cytometry Using Concurrent Staining of DNA and Mitotic Markers
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] The flow cytometric quantitation of DNA content by DNA-binding fluorochrome, propidium iodide (PI) is the most widely used method for cell cycle analysis. However, the commonly used methods are time-consuming and labor-intensive and are incompatible with staining of mitotic markers by fluorescent-labeled antibodies. Here, we report an optimized simple protocol for rapid and simultaneous analysis of characteristic mitotic phosphorylated proteins and DNA content, permitting the quantification of cells in mitosis, G1, S and G2 stage in a single assay. The protocol detailed here employs detergent-based hypotonic solution to rapidly permeabilize cells and allows simultaneous staining of DNA with PI and mitotic marker, phospho-Histone H3, with specific antibody within 20 ...
[摘要] DNA结合荧光染料，碘化丙啶（PI）对DNA含量的流式细胞定量是细胞周期分析中使用最广泛的方法。 然而，常用的方法是耗时且劳动密集的，并且与通过荧光标记的抗体对有丝分裂标记物的染色不相容。 在这里，我们报告了一个优化的简单方案，用于快速和同时分析特征有丝分裂磷酸化蛋白和DNA含量，允许在单次测定中有丝分裂，G1，S和G2期细胞的定量。 这里详述的方案采用基于洗涤剂的低渗溶液来快速透化细胞，并允许在20分钟内同时用PI和有丝分裂标记物磷酸组蛋白H3与特异性抗体染色DNA。 该方案仅需要廉价和商业可用的试剂，并且还能够快速和完整地分析细胞周期特征。
【背景】通过流式细胞术进行细胞周期分析主要基于用碘化丙啶（PI）染色测量DNA含量。 PI的化学计量特性确保DNA含量的准确定量，并且允许我们揭示G1，S和G2细胞周期阶段或G1期细胞死亡期细胞的分布，后者以DNA片段化为特征。用于基于PI的DNA定量的大多数常用方法需要使用酒精或醛固色，这是耗时且劳动密集型的。此外，这些方法与通过荧光标记的抗体对有丝分裂标记物的染色不相容。因此，我们采用和优化了以前建立的低渗缓冲液以使细胞透化，允许用PI和有丝分裂标记物磷酸组蛋白H3（pH3）同时染色DNA与pH3特异性抗体（Riccardi等人，2006; Liu et al。 ...
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