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Penicillin-Streptomycin-Glutamine (100X)

青霉素 - 链霉素 - 谷氨酰胺(100X)

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: 10378016
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Company-protocol()
Other protocol()

The RiboPuromycylation Method (RPM): an Immunofluorescence Technique to Map Translation Sites at the Sub-cellular Level
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract]  While isotopic labeling of amino acids remains the reference method in the field for quantifying translation rate, it does not provide any information on spatial localization of translation sites. The rationale behind developing the ribopuromycylation method (RPM) was primarily to map translation sites at the sub-cellular level while avoiding detection of newly synthesized proteins released from ribosomes. RPM visualizes actively translating ribosomes in cells via standard immunofluorescence microscopy in fixed and permeabilized cells using a puromycin-specific monoclonal antibody to detect puromycylated nascent chains trapped on ribosomes treated with a chain elongation inhibitor. [摘要]  尽管氨基酸的同位素标记仍然是用于定量翻译速率的领域中的参考方法,但是其不提供关于翻译位点的空间定位的任何信息。 开发ribopuromycylation方法(RPM)的基本原理主要是在亚细胞水平上绘制翻译位点,同时避免检测从核糖体释放的新合成的蛋白质。 RPM通过使用嘌呤霉素特异性单克隆抗体的固定的和透化的细胞中的标准免疫荧光显微镜可视化主动翻译细胞中的核糖体以检测捕获在用链延长抑制剂处理的核糖体上的嘌呤化新生链。

【背景】几十年来,氨基酸的同位素标记被认为是研究蛋白质翻译的金标准。虽然这种方法已被证明是非常准确的评估翻译率,它没有提供翻译核糖体的位置信息。最近,氨基酸类似物使荧光检测新生链(Dieterich等人,2007)。然而,几乎所有检测到的信号都来自核糖体释放的多肽。我们最初的想法是开发一种方法来标记新生链,同时还束缚于翻译核糖体。

嘌呤霉素(PMY)是一种氨基糖苷类抗生素,模拟带电荷的tRNA Tyr并掺入核糖体A位点。因此,PMY通过核糖体催化 - ...

Determining Ribosome Translational Status by Ribo-ELISA
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract]  The Ribo-ELISA was originally developed to elucidate the basis for the ribopuromycylation method (RPM)-based detection of ribosome bound nascent chains. The Ribo-ELISA enables characterization of the translational status of ribosomes, and can be applied to the discovery of super-ribosomal complexes with novel ribosome associated macromolecules that are isolated by physical fractionation in sucrose gradients or other methods. [摘要]  Ribo-ELISA最初是为阐明基于核糖核苷酸化方法(RPM)的核糖体结合新生链检测的基础而开发的。 Ribo-ELISA能够表征核糖体的翻译状态,并且可以应用于通过蔗糖梯度中的物理分离或其他方法分离的新型核糖体相关大分子的超核糖体复合物的发现。

【背景】核糖体是由40S和60S亚单位组成的异构结构,当多个核糖体与单个mRNA结合时,它们以单体和多核糖体存在于细胞中。 另外,翻译核糖体可以与调节翻译的多个分子复合物相关联。 核糖体ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)能够通过核糖体相关新生链的体外嘌呤化检测翻译核糖体(David等人,2012)。 在将嘌呤霉素添加至具有结合的新生链的核糖体时,这种化学反应自发进行。 该方法定量测定每个核糖体中出现的新生链的数量,并且可以用于确定单核细胞相对于多核糖体的翻译状态,并鉴定结合其他大分子的核糖体,其改变其在沉淀柱中的沉降速率或迁移。

Isolation of Primary Human Skeletal Muscle Cells
Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract]  Primary myoblast culture is a valuable tool in research of muscle disease, pathophysiology, and pharmacology. This protocol describes techniques for dissociation of cells from human skeletal muscle biopsies and enrichment for a highly myogenic population by fluorescence-activated cell sorting (FACS). We also describe methods for assessing myogenicity and population expansion for subsequent in vitro study. [摘要]  原代成肌细胞培养是研究肌肉疾病,病理生理学和药理学的有用工具。 该协议描述了通过荧光激活细胞分选(FACS)从人类骨骼肌活检中分离细胞并富集高度肌原细胞的技术。 我们还描述了用于评估随后的体外研究中肌原性和群体扩张的方法。
【背景】来自肌肉活组织检查的原代人成肌细胞是模拟体外人体肌肉疾病的有价值的资源。成肌细胞增殖,分化和融合的改变是许多神经肌肉疾病所共有的特征,并且可以用于测定基于细胞的和药理学的治疗。人类骨骼肌活组织检查,尤其是那些受疾病影响的人,通常含有大量的非肌原细胞,如脂肪细胞和成纤维细胞。因此,纯化肌原细胞进行骨骼肌发育和疾病的体外研究是非常重要的。肌肉疾病的早期研究涉及使用组织外植体或未纯化的分离细胞(Geiger和Garvin,1957; Herrmann等人,1960; Goyle等人,1967; Bishop 1971年),后来,Blau和Webster引入了一种预先电镀技术去除成纤维细胞(Blau and ...

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