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Murashige and Skoog Basal Medium

Murashige & Skoog基础培养基

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: M5519
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Company-protocol()
Other protocol()

RNA Stability Measurements Using RT-qPCR in Arabidopsis Seedlings
Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract]  Steady-state mRNA levels are determined by both the rates of transcription and degradation. Regulation of mRNA stability and/or degradation are key factors that can significantly affect mRNA levels and its biological functions. mRNA stability can be measured indirectly after transcription inhibition. This protocol described a rapid and sensitive method of mRNA stability measurement through quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR) after inhibition of RNA transcription by cordycepin in Arabidopsis seedlings. [摘要]  [摘要] 稳态mRNA的水平取决于转录和降解的速率。mRNA稳定性和/或降解的调节是可以显着影响mRNA水平及其生物学功能的关键因素。mRNA的稳定性可以在转录抑制后间接测量。该协议描述了通过拟南芥幼苗中的虫草素抑制RNA转录后,通过定量逆转录PCR(RT-qPCR)进行mRNA稳定性测定的快速灵敏方法。

[背景] mRNA稳定性的调控是基因表达调控的关键控制点。mRNA的稳定性对基因表达,分子和细胞表型,以及最终对植物发育,防御和其他生物过程都具有深远的影响。多种方法,例如RNA印迹分析,原位杂交,可用于测量转录抑制后的mRNA稳定性。在此协议中,我们描述了一种快速灵敏的方法,通过虫草素抑制转录后,通过RT-qPCR测量mRNA的稳定性。虫草素或3'-脱氧腺苷是腺苷类似物(参见参考文献2 )。可以将3'-脱氧腺苷掺入RNA,并由于3'位置不存在羟基部分而抑制转录延伸和RNA合成(参见参考文献6 )。我们已经成功地使用了这种方便而灵敏的方法来测量拟南芥幼苗中几种低丰度mRNA 的稳定性,包括初级microRNA转录本(Jia 等,2017)。在这里,我们用详细的实验程序和数据分析方法介绍该协议。

Transient Gene Expression for the Characteristic Signal Sequences and the Estimation of the Localization of Target Protein in Plant Cell
Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract]  We have proposed and tested a method for characterization of the signal sequences and determinations of target protein localization in a plant cell. This method, called the AgI-PrI, implies extraction of protoplasts from plant tissues after agroinfiltration. The suggested approach combines the advantages of two widely used methods for transient gene expression in plants–agroinfiltration and transfection of isolated protoplasts. The AgI-PrI technic can be applied to other plant species. [摘要]  我们已经提出并测试了用于表征信号序列和确定植物细胞中目标蛋白质定位的方法。 这种称为AgI-PrI的方法意味着在农杆菌浸润后从植物组织中提取原生质体。 所提出的方法结合了两种广泛使用的用于植物中瞬时基因表达的方法的优点 - 农杆菌浸润和转分离的原生质体。 AgI-PrI技术可应用于其他植物物种。

【背景】迄今为止,已经开发并广泛使用以下用于植物中基因瞬时表达的技术:农杆菌渗入,植物外植体的生物射弹和使用聚乙二醇或电穿孔转染原生质体。这些方法的有效性已被清楚地证明。植物中瞬时表达基因的每种策略以及其益处具有其局限性和缺点,例如由于植物表皮细胞的复杂形状(农杆菌浸润)导致的重组报道蛋白在植物细胞区室中的良好成像困难,低转化效率以及专用设备和辅助材料(用于生物弹)的必要性,以及高活性原生质体产量和有效转染所需的复杂准备程序。这是开发和测试用于在植物细胞中瞬时表达基因的新方法的原因,优选通过改进实验方案并保留研究结果的生理意义。由于蛋白质在包括植物在内的活生物体中的细胞定位与它们的功能密切相关,活细胞中蛋白质的良好可视化成为评估蛋白质功能的重要工具。

Automated Tracking of Root for Confocal Time-lapse Imaging of Cellular Processes
Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract]  Here we describe a protocol that enables to automatically perform time-lapse imaging of growing root tips for several hours. Plants roots expressing fluorescent proteins or stained with dyes are imaged while they grow using automatic movement of the microscope stage that compensates for root growth and allows to follow a given region of the root over time. The protocol makes possible the image acquisition of multiple growing root tips, therefore increasing the number of recorded mitotic events in a given experiment. The protocol also allows the visualization of more than one fluorescent protein or dye simultaneously, using multiple channel acquisition. We particularly focus on imaging of cytokinesis in Arabidopsis root tip meristem, but this protocol is also suitable to follow ... [摘要]  在这里,我们描述一个协议,可以自动执行增长根尖的延时成像几个小时。表达荧光蛋白或用染料染色的植物根据显影阶段的自动移动而成像,其补偿根生长,并允许随着时间跟随根部的给定区域。该协议使图像采集多个生长根尖成为可能,因此增加了给定实验中记录的有丝分裂事件的数量。该协议还允许多个荧光蛋白或染料同时显示,使用多通道采集。我们特别关注在拟南芥根尖分生组织中细胞分裂的成像,但是这种方案也适用于在各种植物物种中追随根毛发生长,花粉管生长和其他根部区域。也可以修改为自动跟踪非植物结构的根尖增长。

细胞因子是细胞分裂的最后一步,当母细胞细胞质在两个子细胞之间分配(Lipka等人,2015)时。在植物中,通过分裂平面中的细胞板的离心扩张实现,其最终成为经历有丝分裂的细胞之间的新合成的细胞壁(Buschmann和Zachgo,2016;Müller和Jürgens,2016)。植物细胞嵌入僵硬的细胞壁,不能迁移。因此细胞分裂与伸长的取向对于器官形态发生至关重要。根分生组织是研究细胞分裂的一个很好的模型,因为它们容易适用于显微技术,而不需要解剖。然而,进行细胞分裂的根长度增长,因此需要随时间手动调整观察场。该协议允许容易地延迟细胞分裂成像和其他细胞过程。

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