| Generating Three-dimensional Human Granulomas in vitro to Study Mycobacterium tuberculosis-host Interaction
|
|
Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] Granulomas are organized multicellular structures that constitute the hallmark of an infection by the human pathogen Mycobacterium tuberculosis (Mtb). A better understanding of the complex host-Mtb interactions within the granuloma’s environment may lead to new therapeutic or preventive tools to improve the control of the tuberculosis pandemic. To date, several in vitro models that are able to mimic human nascent granulomas have been reported. Here we describe a protocol in which Mtb-infected human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are embedded within a collagen matrix leading to the formation of three-dimensional micro-granulomas. Subsequently, PBMCs and Mtb can be retrieved allowing multiparametric readouts from both the host and the ...
[摘要] [摘要]肉芽肿是有组织的多细胞结构，构成了人类病原体结核分枝杆菌（Mtb ）感染的标志。对肉芽肿环境中复杂的宿主-Mtb相互作用的更好理解可能会导致新的治疗或预防工具，以改善对结核病大流行的控制。迄今为止，已经报道了几种能够模仿人类新生肉芽肿的体外模型。在这里我们描述一个协议，其中Mtb 被感染的人外周血单核细胞（PBMC）嵌入胶原蛋白基质中，导致形成三维微肉芽肿。随后，可以检索PBMC和Mtb，从而从宿主和病原体中读取多参数。除了并入生理性细胞外基质外，该模型还具有重现休眠样Mtb特征的独特优势，以及在免疫调节治疗下观察到的Mtb复苏的再生，其他已发表的体外实验方法尚未见报道。肉芽肿。
关键词：分枝杆菌，浴池erculosis，肉芽肿，主机，我ñ体外模型，休眠，复苏
[背景]结核病（TB）是一种空气传播的疾病，其包括由人类病原体肺和肺外感染结核分枝杆菌（Mtb的）。结核病在2019年估计造成150万人死亡（世卫组织，2019年），仍然是世界上最致命的传染病。结核病免疫发病机制的特点是形成了组织性的，称为肉芽肿的多细胞簇（Gengenbacher和Kaufmann，2012）。这些结构主要由被感染的和未感染的巨噬细胞的核心组成，周围是淋巴细胞边缘。肉芽肿内的敌对环境推动Mtb进入可能与疾病的潜在形式相关的缓慢或非复制性休眠状态。因此，Mtb休眠导致对针对分枝杆菌复制过程中活跃的代谢途径的抗生素的耐受性增加。 ...
|
|
|
| A Method to Efficiently Cryopreserve Mammalian Cells on Paper Platforms
|
|
Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] This protocol describes a simple method to cryopreserve mammalian cells within filter papers as an alternative to conventional slow-freezing approach. The method involves treating paper fibers with fibronectin, using low concentrations of the cryoprotectant dimethyl sulfoxide (DMSO), and slow freezing cells to -80 °C at a 1 °C min-1 rate. In our method, the biocompatibility, large surface area, 3D porosity and fiber flexibility of the paper, in combination with the fibronectin treatment, yield recovery of cells comparable to conventional approaches, with no additional fine-tuning to freezing and thawing procedures. We expect that the paper-based cryopreservation method will bring several advantages to the field of preserving mammalian cells, including accommodation of a higher ...
[摘要] [摘要] 该协议描述了一种简单的方法，可在滤纸中冷冻保存哺乳动物细胞，以替代常规的慢速冷冻方法。该方法包括使用纤连蛋白处理纸纤维，使用低浓度的冷冻保护剂二甲基亚砜（DMSO），然后以1°C min -1的速率将细胞缓慢冷冻至-80°C 。在我们的方法中，纸的生物相容性，大表面积，3D孔隙率和纤维柔韧性与纤连蛋白处理相结合，可产生与传统方法相当的细胞回收率，而无需对冷冻和解冻程序进行额外的微调。我们期望纸质冷冻保存方法这将为保存哺乳动物细胞领域带来几项优势，包括在单位体积内容纳更多数量的细胞，并且释放后无细胞损失。该方法需要最小的存储空间，在该存储空间中，可以将具有大面积的纸平台卷起和/或折叠并存储在库存中，并允许按需方式有效地运输/分配细胞。此外，该方法的另一个特征包括细胞球体和3D细胞培养物的形成和冷冻保存。
[背景] 哺乳动物细胞的成功保存，长期保存，维护和分配是重要的研究领域，目前仍在深入的科学研究中。特别是，冷冻细胞的及时稳定供应与组织工程研究有关，例如细胞培养，药物开发和测试以及再生和生物治疗医学。
当前的常规细胞冷冻保存方案包括缓慢和快速的冷冻和玻璃化（Pegg，2002； Baust 等，2009）。在这些方法中，将各种浓度的冷冻保护剂添加到细胞悬浮液中，然后以低至1°C min -1 ...
|
|
|
| Adhesion Assay for Murine Bone Marrow Hematopoietic Stem Cells
|
|
Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] Hematopoietic stem cells (HSCs) are defined by their functional abilities to self-renew and to give rise to all mature blood and immune cell types throughout life. Most HSCs are retained in a non-motile quiescent state within a specialized protective microenvironment in the bone marrow (BM) termed the niche. HSCs are typically distinguished from other adult stem cells by their motility capacity. Movement of HSCs across the physical barrier of the marrow extracellular matrix and blood vessel endothelial cells is facilitated by suppression of adhesion interactions, which are essential to preserve the stem cells retained within their BM niches. Importantly, homing of HSCs to the BM following clinical transplantation is a crucial first step for the repopulation of ablated BM as in the case of ...
[摘要] 造血干细胞（HSC）由其自我更新的功能定义，并在整个生命中产生所有成熟的血液和免疫细胞类型。大多数HSC在被称为利基的骨髓（BM）的专门的保护性微环境内保持在非运动性静止状态。 HSC通常通过其运动能力与其他成体干细胞区分开来。通过抑制粘附相互作用促进骨髓细胞外基质和血管内皮细胞的物理屏障的移动，这是保留在其BM细胞壁内保留的干细胞所必需的。重要的是，在临床移植后将HSC归巢到BM是重建消融BM的关键的第一步，就像血液恶性肿瘤治疗策略一样。归位过程结束于HSC的选择性访问和锚定到其在BM内的专门的位置。粘附分子是在干细胞移植的情况下增强归巢或减少BM保留以从匹配供体的血液中收集动员的HSC的靶标。在HSC上功能表达并参与其归巢和保留的主要粘附蛋白是整合素α4β1（非常晚的抗原-4; VLA4）。在该方案中，我们引入了针对表达VLA4的鼠骨髓干细胞优化的粘附测定。该测定法在分离表达VLA4的贴壁细胞后，通过流式细胞术与HSC富集细胞表面标记物定量粘附的HSC。
背景 HSCs主要保留在BM中，并通过与其微环境（niche）的粘合相互作用来调节。以这种方式，HSC保持在非运动性静止状态，保护它们免受DNA损伤代理（Boulais和Frenette，2015; Mendelson和Frenette，2014; ...
|
|
|