| Preparation, Stimulation and Other Uses of Adult Rat Brain Synaptosomes
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] In this paper, our protocol for preparation of brain synaptosomes is described. Synaptosomes are a valuable model system for analysis of structural components of the synapse as well as for investigation of synaptic function. Synaptosomal preparations are necessary for understanding molecular changes at synapses where critical post-translational modifications of synaptic proteins may occur. Not only are synaptosomes rich in synaptic proteins, but they can be used for analyzing uptake of neurotransmitters into synaptic vesicles and for analysis of the involvement of neurotransmitter synthesis and release. Synaptosomes can be stimulated with increased calcium influx to release neurotransmitters. Synaptosomal preparations have been used in characterizing calcium dependent phosphorylation and ...
[摘要] 在这篇论文中，我们描述了制备脑突触体的方案。突触体是用于分析突触的结构组分以及用于调查突触功能的有价值的模型系统。突触体制备对于理解可能发生突触蛋白的关键翻译后修饰的突触处的分子变化是必需的。突触小体不仅含有丰富的突触蛋白，还可用于分析神经递质向突触小泡的摄取和神经递质合成和释放的参与分析。可以用增加的钙内流刺激突触体释放神经递质。突触体制剂已被用于表征钙依赖性磷酸化和GABA合成酶GAD65（分子量为65kDa的L-谷氨酸脱羧酶）的活化。通过检查从突触体制剂获得的突触小泡膜上的蛋白质复合物，可以表征GAD65在GABA囊泡释放的偶联合成和囊泡摄取中的作用，这最终导致GABA囊泡释放GABA能神经传递的微调方法。
【背景】突触体制备方法在40多年前在神经科学研究实验室中建立，并且在涉及神经递质释放相关的细胞外钾升高以及对细胞内钙增加的应答方面具有极大的价值。除了阐明神经递质释放的过程之外，突触体制剂已经成为突触囊泡的有价值的来源。关于突触小泡的研究已经被用于表征参与偶联的神经递质合成和囊泡释放的蛋白质组分。突触体制剂作为突触囊泡分离的中间体也是非常有价值的，然后根据位于包含神经递质合成酶的囊泡膜上的蛋白质复合物进行分析。在这方面关键的意义在于包括CSP（胱氨酸 - ...
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| [14C] Linoleic Acid Uptake and Fractionation Assay in Vibrio cholerae
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Author:
Date:
2015-12-20
[Abstract] The gram-negative curved bacillus Vibrio cholerae (V. cholerae) causes the severe diarrheal illness cholera. The work presented here is to assess whether unsaturated fatty acids (UFAs), such as linoleic acid, have the potential to directly affect proteins involved in DNA binding because they are able to enter the cell. In this protocol, we show how to measure linoleic acid entering V. cholerae when added exogenously and determine whether it is able to enter the cytoplasm. This protocol will quantify how much linoleic acid is able to enter the cell and then identify the amount of linoleic acid that stays in the membrane or ultimately enters the cytoplasm.
[摘要] 革兰氏阴性弯曲杆菌霍乱弧菌（<霍乱弧菌）导致严重的腹泻病霍乱。 这里介绍的工作是评估是否不饱和脂肪酸（ufas），如亚油酸，有可能直接影响参与dna结合的蛋白质，因为他们能够进入细胞。 在这个协议，我们显示如何测量亚麻酸进入。 霍乱菌，并且确定它是否能够进入细胞质。 该方案将量化亚油酸能够进入细胞多少，然后鉴定保留在膜中或最终进入细胞质的亚油酸的量。
这里介绍的工作是评估是否不饱和脂肪酸（ufas），如亚油酸，有可能直接影响参与dna结合的蛋白质，因为他们能够进入细胞。="" 在这个协议，我们显示如何测量亚麻酸进入。="" 霍乱菌，并且确定它是否能够进入细胞质。="" 该方案将量化亚油酸能够进入细胞多少，然后鉴定保留在膜中或最终进入细胞质的亚油酸的量。="">
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