| Enzymatic Activity Assay for Invertase in Synechocystis Cells
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Invertase can catalyze the hydrolysis of sucrose, and is widely distributed in cells of cyanobacteria and plants. Being responsible for the first step for sucrose metabolism, invertase plays important physiological roles and its enzymatic activity is frequently needed to be determined. All the methods for determination of the invertase activity are dependent on detection of the glucose product generated by the invertase. Here we describe an ion chromatography based protocol of our laboratory for determination of cyanobacterial intracellular invertase activity.
[摘要] 转化酶可催化蔗糖的水解，广泛分布于蓝细菌和植物细胞中。 负责蔗糖代谢的第一步，转化酶起着重要的生理作用，其酶活性经常需要确定。 所有测定转化酶活性的方法都依赖于转化酶产生的葡萄糖产物的检测。 在这里我们描述了我们的实验室用于测定蓝细菌细胞内转化酶活性的基于离子色谱的方案。
【背景】转化酶和蔗糖在蓝细菌中发挥重要的生理作用（Curatti，et al。，2008; Kolman等人，2015）和高等植物（Vargas等人， ，2003; Vargas et。，2010）。转化酶（EC 3.2.1.26）可以催化蔗糖降解成葡萄糖和果糖。由于转化酶的这种特性，任何可用于测定葡萄糖或果糖的方法理论上都将用于转化酶酶活性测定。实际上，大多数转化酶酶活性测定基于检测产生的葡萄糖产物。
一些公司已经开发了用于转化酶活性测定的几种试剂盒，例如来自abcam（USA）的ab197005，来自Novus Biologicals（USA）的KA1629，来自Sigma-Aldrich（USA）的MAK118。通过使用这些试剂盒，由转化酶反应产生的葡萄糖产物将被氧化并通过比色（570nm）或荧光法（λem/ ex = 585 / ...
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| A Method for Extracting the Nuclear Scaffold from the Chromatin Network
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Each cell contains many large DNA polymers packed in a nucleus of approx. 10 μm in diameter. With histones, these DNA polymers are known to form chromatins. How chromatins further compact in the nucleus is unclear but it inevitably depends on an extensive non-chromatin nuclear scaffold. Imaging of endogenous chromatin network and the complementary scaffold that support this network has not been achieved but biochemical and proteomic investigations of the scaffold can still provide important insights into this chromatin-organizing network. However, this demands highly inclusive and reproducible extraction of the nuclear scaffold. We have recently developed a simple protocol for releasing the scaffold components from chromatins. The inclusiveness of the extract was testified by the ...
[摘要] 每个细胞都含有许多大型DNA聚合物，其中包含大约一个核。直径10微米。用组蛋白，已知这些DNA聚合物形成染色质。染色质在核中如何进一步致密还不清楚，但它不可避免地依赖于广泛的非染色质核支架。内源性染色质网络的成像和支持该网络的互补支架尚未实现，但支架的生化和蛋白质组学研究仍然可以提供关于该染色质组织网络的重要见解。但是，这需要高度包容和可重复的提取核支架。我们最近开发了一个简单的协议，用于从染色质中释放脚手架组件。提取物的包容性由以下观察结果证实：当从核中提取时，剩余的核染色质被释放为延伸且通常平行的染色质纤维。基本上，该方案包括纯核的产生，用Triton X-100处理细胞核以产生包膜消耗的细胞核（TxN），并在含蔗糖的缓冲液中在500mM NaCl中提取细胞核。 TxN的这个组合提取被称为TxNE。
【背景】通过蛋白质和核糖核蛋白的复杂支架，染色质在细胞核中密集并动态地压缩。与细胞骨架网络不同（Fischer和Fowler，2015），对这种核支架的显微观察在技术上是具有挑战性的。这可能反映了每个细胞核内染色质的主导地位，支架与细胞核交织在一起。核的球形排列也对成像这种支架结构造成挑战。核支架的主要元素是核层（NL）（Gruenbaum和Foisner，2015）。 ...
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| Polyamine and Paraquat Transport Assays in Arabidopsis Seedling and Callus
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] Polyamines (PAs) are polycationic compounds found in all living organisms and play crucial roles in growth and survival. We here show the ‘Polyamine and paraquat (PQ) transport assay’ protocol, which can be used to examine the uptake activity of PA/PQ transporters. We have used this protocol to demonstrate that PUT3 in Arabidopsis is a polyamine transporter and is able to take up spermidine and its analog paraquat.
[摘要] 多胺（PA）是在所有生物体中发现的聚阳离子化合物，在生长和生存中起关键作用。 我们在这里展示了“多胺和百草枯（PQ）运输测定”方案，可用于检查PA / PQ转运蛋白的摄取活性。 我们已经使用该协议来证明拟南芥中的PUT3是多胺转运蛋白，并且能够吸收亚精胺及其类似百草枯。
【背景】PA通过与阴离子大分子如DNA，RNA和蛋白质的功能相互作用和调节而参与基因调控。 在活细胞中，必须调节PA的含量以维持细胞止血。 在高等植物中，三种主要的多胺，腐胺（Put），亚精胺（Spd）和精胺（Spm）以游离形式或缀合形式与其他分子一起存在（Gill和Tuteja，2010）。 在酵母中，鉴定了四种质膜多胺转运体DUR3，SAM3，GAP1和AGP2（Uemura等人，2007）。 在拟南芥中，鉴定了5种推定的多胺摄取转运蛋白（PUT1-PUT5），并且PUT1-3已被实验验证为多胺转运蛋白（Mulangi等人，2012; Li et al，2013）。 我们以下所述的方案成功证实了PUT3是多胺和百草枯的流入转运蛋白，并且在Put3突变体（Shen等人，2016）中PQ /Spd吸收受损）。
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