| In vitro Co-culture of Mesenchymal Stem Cells and Endothelial Colony Forming Cells
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] The discovery of endothelial colony forming cells (ECFCs) with robust self-renewal and de novo vessel formation potentials suggests that ECFCs can be an excellent cell source for cardiovascular diseases treatment through improving neovascularization in the ischemic tissues. However, their engraftment after transplantation resulted to be low. Previous studies showed mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) could improve the survival and capillary formation capacity of ECFCs in co-culture systems. In this article, we describe a protocol for in vitro co-culture of MSCs and ECFCs to prime ECFCs for better engraftment.
[摘要] 发现具有强大自我更新和从头血管形成潜力的内皮细胞集落形成细胞（ECFCs）表明，ECFC可以通过改善缺血组织的新生血管形成，成为心血管疾病治疗的优良细胞来源。 然而，移植后的移植导致了低位移植。 以前的研究显示间充质干/基质细胞（MSC）可以改善共培养系统中ECFCs的存活和毛细管形成能力。 在这篇文章中，我们描述了体外协调MSCs和ECFCs共同培养ECFC以实现更好的移植。
【背景】内皮祖细胞（EPC）被定义为能够通过血管发生过程形成新血管的细胞群。 2004年，Ingram等人鉴定了来自人脐带血的称为“内皮细胞集落形成细胞（ECFC）”的离体培养物中的特异性高度增殖的EPC群体Ingram等人，2004），并且这些细胞最近被宣布代表EPCs（Medina等人，2017）。类似的群体也可以从具有等效血管化潜力和临床相关数量的人类胎盘组织中分离（Patel等人，2013; Shafiee等人，2015） ）。因此，ECFC移植已被提出作为缺血性疾病如心肌梗塞或关键性腿部缺血的治疗方法。然而，移植后的ECFCs植入物和血管生成潜力被证明是低的（Shafiee等人，2017; ...
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| Isolation of FAP Cells from Mouse Dystrophic Skeletal Muscle Using Fluorescence Activated Cell Sorting
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Author:
Date:
2014-11-20
[Abstract] A population of muscle resident CD45-, CD31- cells expressing the mesenchymal PDGF receptor alpha (PDGFRα) as well as Sca-1 was first isolated in healthy mouse muscles in Uezumi et al. (2010). In the same year, Joe et al. (2010) identified and purified fibro-adipogenic precursors (FAPs), cells located into the interstitial space between myofibers close to vessels, negative for CD45, CD31,α7-Integrin, but expressing CD34, Sca-1.
Both groups demonstrated that these cells are not myogenic in vitro or in vivo, but they are capable of differentiating in vitro towards both fibrogenic and adipogenic lineage (Uezumi et al., 2011). Further marker analysis indicates that the two groups identified independently ...
[摘要] 首先在Uezumi等人的健康小鼠肌肉中分离表达间充质PDGF受体α（PDGFRα）以及Sca-1的肌肉驻留CD45 - ，CD31 -/- em。等人（2010）。在同一年，Joe等人（2010）鉴定并纯化了成纤维脂肪生成前体（FAP），位于靠近血管的肌纤维之间的间隙空间中的细胞，CD45，CD31，α7-整合素，但是表达CD34，Sca-1。两个小组都证明这些细胞在体外不是肌原性的或在体内，但它们能够区分< （Uezumi等人，2011），其在体外对于纤维形成和脂肪形成谱系起作用。进一步的标记分析表明两组独立地鉴定了相同的细胞群体（Natarajan等人，2010）。
FAP是营养不良骨骼肌中的纤维化和脂肪形成的重要来源（Natarajan& et al。，2010; Cordani et al。，，2014）。我们最近已经证明，一氧化氮调节FAP命运在体外抑制它们向脂肪细胞的分化。在mdx 小鼠中，DMD的动物模型，其中饲喂含有一氧化氮给药药物莫西沙星，PDGFRα +细胞数目的DMD，以及沉积的骨骼肌脂肪和结缔组织（Cordani等人，2014）。在这里我们描述了通过双重选择SCA-1和PDGFRα阳性在不存在卫星细胞标记物SM/C2.6和α7整联蛋白的情况下分离野生型和mdx营养不良肌肉纯FAP群体的方法，淋巴细胞标记物CD45或内皮标记物CD31 ...
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| ADCC Assay Protocol
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Author:
Date:
2014-01-20
[Abstract] Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) bridges innate and adaptive immunity, and it involves both humoral and cellular immune responses. ADCC has been found to be a main route of immune protection against viral infections and cancers in vivo. Here we developed a flow cytometry based protocol for ADCC assay using human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) as effector cells. Using this protocol, we determined the ADCC activity of convalescent plasma IgGs from six H1N1-infected human subjects in China, and identified two dominant ADCC epitopes, designated E1 [amino acid (AA) 92-117] and E2 (AA 124-159), on haemagglutinin of pandemic H1N1 influenza virus by epitope mapping of the convalescent plasma IgGs with different levels of ADCC activity. Our study may aid in ...
[摘要] 抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）桥接先天和适应性免疫，并且其涉及体液和细胞免疫应答。已经发现ADCC是针对体内病毒感染和癌症的免疫保护的主要途径。在这里，我们开发了基于流式细胞术的协议，使用人类外周血单核细胞（PBMCs）作为效应细胞ADCC测定。使用这个协议，我们确定在中国六个H1N1感染人类受试者的恢复期血浆IgG的ADCC活性，并确定两个显性ADCC表位，指定E1 [氨基酸（AA）92-117]和E2（AA 124-159） ，通过具有不同水平的ADCC活性的恢复血浆IgG的表位作图对大流行性H1N1流感病毒的血凝素进行。我们的研究可能有助于设计可以引发具有高ADCC活性的抗体的免疫原。设计为包括有效的广泛中和抗体和ADCC表位的结构决定簇的疫苗免疫原可以赋予针对病毒感染的全面免疫保护。
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