| Determination of Local pH Differences within Living Salmonella Cells by High-resolution pH Imaging Based on pH-sensitive GFP Derivative, pHluorin(M153R)
|
|
Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The bacterial flagellar type III protein export apparatus is composed of a transmembrane export gate complex and a cytoplasmic ATPase complex. The export apparatus requires ATP hydrolysis and the proton motive force across the cytoplasmic membrane to unfold and transport flagellar component proteins for the construction of the bacterial flagellum (Minamino, 2014). The export apparatus is a proton/protein antiporter that couples the proton flow with protein transport through the gate complex (Minamino et al., 2011). A transmembrane export gate protein, FlhA, acts as an energy transducer along with the cytoplasmic ATPase complex (Minamino et al., 2016). To directly measure the proton flow through the FlhA channel that is coupled with the flagellar protein export, we have ...
[摘要] 细菌鞭毛III型蛋白质输出装置由跨膜出口门复合物和胞质ATP酶复合物组成。出口设备需要ATP水解和跨细胞质膜的质子动力来展开和转运鞭毛成分蛋白以构建细菌鞭毛（Minamino，2014）。出口设备是质子/蛋白质反向转运体，其将质子流与通过门络合物的蛋白质转运相结合（Minamino等，2011）。跨膜输出门蛋白FlhA与胞质ATP酶复合物一起作为能量转导（Minamino等，2016）。为了直接测量通过与鞭毛蛋白输出相结合的FlhA通道的质子流，我们开发了具有高空间和pH分辨率的体内pH成像系统（Morimoto等，2016）。在这里，我们描述了我们如何测量生活沙门氏菌细胞出口设备附近的局部pH（Morimoto et al。，2016）。我们的方法可以应用于广泛的活细胞。由于局部pH值是监测活细胞活性的最重要参数之一，因此我们的方案将广泛应用于生命科学的各个领域。
【背景】已经检测到跨膜质子通道复合物的质子通道活性是细菌细胞的细胞质pH降低（Morimoto等，2010; Che等，2014; Furukawa等，2017）。然而，为了详细测量活细胞中膜复合物的质子通道活性，需要精确测量局部细胞质pH。绿色荧光蛋白（GFP）的衍生物，pHluorin，激发波长为410和470 nm，发射于508 nm是测量活细胞胞质pH值的有用探针（Miesenböcket ...
|
|
|
| Vacuole Structure Analysis during Cell Death Subsequent to Application of Erwinia carotovora Culture Filtrates to Cell Cultures of Nicotiana tabacum
|
|
Author:
Date:
2015-10-20
[Abstract] We recently established an experimental model system for efficient defense-related cell death using tobacco BY-2 cultured cells treated with culture filtrates of the pathogenic bacterium Erwinia carotovora (E. carotovora) (Hirakawa et al., 2015). Applying this experimental system to transgenic BY-2 cells stably expressing the vacuolar membrane marker GFP-VAM3 (Kutsuna and Hasezawa, 2002) allowed us to monitor changes in vacuolar membrane structures including a decrease of transvacuolar strands during cell death (Hirakawa et al., 2015). Our model system can help to investigate organelle dynamics in defense-related cell death. Here, we show protocol for applying E. carotovora filtrates to BY-2 cells and confocal observation of vacuolar membrane ...
[摘要] 我们最近建立了使用烟草BY-2培养细胞的有效防御相关细胞死亡的实验模型系统，所述培养细胞用致病性细菌欧文氏菌（Erwinia carotovora）（ E。carotovora （Hirakawa ，，2015）。将该实验系统应用于稳定表达液泡膜标记物GFP-VAM3的转基因BY-2细胞（Kutsuna和Hasezawa，2002），使我们能够监测液泡膜结构的变化，包括细胞死亡期间跨血管链的减少（Hirakawa et al。 al。，2015）。我们的模型系统可以帮助调查细胞器动力学在国防相关的细胞死亡。在这里，我们显示应用 E的协议。 carotovora过滤到BY-2细胞和共聚焦观察液泡膜动力学和随后的细胞死亡。我们使用细胞周期同步的BY-2细胞来有效地监测内陷的液泡膜，例如在我们最近的报告中的跨血管链（Hirakawa等人，2015）;然而，我们不描述本文中的细胞周期同步的协议。对于BY-2细胞同步的逐步方案，请参考先前的方案论文（Nagata和Kumagai，1999; Kumagai-Sano等人，2006）。
|
|
|