| An HPLC-based Method to Quantify Coronatine Production by Bacteria
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Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Coronatine is a polyketide phytotoxin produced by several pathovars of the plant pathogenic bacterium Pseudomonas syringae. It is one of the most important virulence factors determining the success of bacterial pathogenesis in the plant at both epiphytic and endophytic stages of the disease cycle. This protocol describes an optimized procedure to culture bacterial cells for coronatine production and to quantify the amount of coronatine secreted in the culture medium using an HPLC-based method.
[摘要] 冠心病是由植物病原菌的几种病原体产生的聚酮化合物植物毒素。它是在疾病周期的附生和内生期阶段确定植物细菌发病机制成功的最重要的毒力因素之一。该方案描述了用于培养用于冠状病毒产生的细菌细胞的优化方法，并且使用基于HPLC的方法定量培养基中分泌的冠状动脉的量。
背景 Coronatine（COR）是有效的细菌植物毒素，是植物激素茉莉酮酸-L异亮氨酸（JA-Ile）的分子模拟物。因此，COR激活茉莉酸（JA）信号传导，诱导JA响应基因，并拮抗免疫信号水杨酸的作用。 COR由两种成分组成：冠心病（CFA）和冠状氨酸（CMA）。编码CMA和CFA生物合成的基因在细菌中不是组成型表达的。相反，当细菌在诱导培养基中生长时，这些基因在植物叶片表面或植物体内或/或体外诱导（Palmer和Bender，1993; Panchal等等，2016）。本文介绍了从Panchal等人改编的方法。 （2016），以确定细菌产生冠心病的能力，可用作毒性指征。
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| Surface Inoculation and Quantification of Pseudomonas syringae Population in the Arabidopsis Leaf Apoplast
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Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Bacterial pathogens must enter the plant tissue in order to cause a successful infection. Foliar bacterial pathogens that are not able to directly penetrate the plant epidermis rely on wounds or natural openings to internalize leaves. This protocol describes a procedure to estimate the population size of Pseudomonas syringae in the leaf apoplast after surface inoculation of Arabidopsis rosettes.
[摘要] 细菌病原体必须进入植物组织才能使感染成功。不能直接穿透植物表皮的叶状细菌病原体依赖于伤口或自然开口使叶片内化。该方案描述了在表达接种拟南芥花环之后，在叶片质外体中估计结核菌的种群大小的程序。
背景 引起叶面疾病的植物病原菌可能通过伤口和天然开放（如气孔）穿透叶片表皮。气孔是介导调节蒸腾作用和植物与大气之间的气体交换的微观孔。有趣的是，我们已经证明细菌可以诱导气孔关闭。这种现象现在被认为是气孔防御，其阻碍细菌内化进入叶减少的疾病发展（由Melotto等人，2017年，在新闻中综述）。在这里，我们描述了从Katagiri等人改编的方法。 （2002）和Panchal等人。 （2016a和2016b）测量表面接种后拟南芥叶组织中的丁香假单胞菌的总内生细菌群体。该程序可用于在实验室环境中评估通过气孔的叶片细菌渗透。
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| Expression and Partial Purification of His-tagged Proteins in a Plant System
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Author:
Date:
2015-09-05
[Abstract] Plant protein expression can be a challenging enterprise in any biochemical or molecular biology research project. Several heterologous systems like bacteria, yeast, insect cells and cell free systems have been used to produce plant proteins for in vitro experiments and structural characterization. However, due to particularities of plant proteins, for example the specific type and abundance of post-translational modifications (e.g. glycosylation), a plant system to express plant proteins is extremely desirable. The use of Nicotiana benthamiana (N. benthamiana) plants for protein expression has proven to be quick and reliable. To illustrate the robustness and rapidity of this system, recent efforts to produce the first protein based drug against the ...
[摘要] 植物蛋白表达可以是任何生物化学或分子生物学研究项目中的挑战性企业。几种异源系统如细菌，酵母，昆虫细胞和无细胞系统已被用于生产植物蛋白用于体外实验和结构表征。然而，由于植物蛋白的特殊性，例如翻译后修饰（例如糖基化）的特异性类型和丰度，表达植物蛋白的植物系统是非常需要的。已经证明使用本氏烟草（本生烟草）植物进行蛋白质表达是快速和可靠的。为了说明该系统的稳健性和快速性，最近在N中进行了生产针对埃博拉病毒的第一种基于蛋白质的药物的努力。本草案蛋白质表达系统（Choi等人，2015）。
该方案描述了一种简单的系统，用于表达和富集（亲和纯化） > N。本生烟草叶，其被成功地用于拟南芥果胶乙酰酯酶，PAE8和PAE9的表征中（de Souza等人，2014）。
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