| Qualitative in vivo Bioluminescence Imaging
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Bioluminescence imaging (BLI) technology is an advanced method of carrying out molecular imaging on live laboratory animals in vivo. This powerful technique is widely-used in studying a variety of biological processes, and it has been an ideal tool in exploring tumor growth and metastatic spread in real-time. This technique ensures the optimal use of laboratory animal resources, particularly the ethical principle of reduction in animal use, given its non-invasive nature, ensuring that ongoing biological processes can be studied over time in the same animal, without the need to euthanize groups of mice at specific time points. In this protocol, the luciferase imaging technique was developed to study the effect of co-inoculating pericytes (contractile, αSMA+ mesenchymal ...
[摘要] 生物发光成像（BLI）技术是一种在体内实验室动物上进行分子成像的先进方法。 这种强大的技术广泛应用于研究各种生物过程，是实时探索肿瘤生长和转移扩散的理想工具。 该技术确保实验室动物资源的最佳利用，特别是减少动物使用的伦理原则，考虑到其非侵入性，确保可以在同一动物中随时间研究正在进行的生物过程，而无需安乐死 小鼠在特定的时间点。 在该方案中，开发了荧光素酶成像技术以研究共同接种周细胞（收缩性，αSMA + 间充质干细胞样细胞，位于微血管内的细胞）对生长和转移性扩散的影响。 卵巢癌使用侵袭性卵巢癌细胞系-OVCAR-5-作为例子。
【背景】生物发光成像（BLI）的原理是基于相对简单的生化过程的发光特性，即，荧光素酶介导的分子底物荧光素氧化产生光。在癌症研究中，BLI是一种流行的工具（Contag et ...
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| Phagocytosis Assay for α-Synuclein Fibril Uptake by Mouse Primary Microglia
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Microglia are professional phagocytes in the brain and deficiency in their phagocytic activity plays an important role in Parkinson’s disease. This protocol mainly describes the phagocytosis assay for uptake of α-synuclein preformed fibrils, a pathologic form of α-synuclein, by primary microglia.
[摘要] 小胶质细胞是大脑中的专业吞噬细胞，其吞噬活性的缺乏在帕金森病中起重要作用。 该方案主要描述了通过原代小胶质细胞摄取α-突触核蛋白预先形成的原纤维（α-突触核蛋白的病理形式）的吞噬作用测定。
【背景】作为大脑的免疫细胞，小胶质细胞在中枢神经系统中起着关键作用。在生理状态下，小胶质细胞不断探索周围环境并参与突触修剪。小胶质细胞可被任何类型的病理事件或脑内稳态的变化激活（Wolf et al。，2017）。激活后，小胶质细胞经历形态学变化，增殖，分泌炎性细胞因子，迁移至病变部位，吞噬病原体，病细胞，碎片，甚至细胞外蛋白质聚集体（Kettenmann et al。，2011; Fu et al。，2014）。 α-突触核蛋白是神经元中的丰富蛋白质，并且是帕金森病中称为路易体和路易神经突的神经元内包涵体的主要成分（Luk 等人，，2012）。最近的研究表明α-突触核蛋白经历细胞间扩散，小胶质细胞是α-突触核蛋白的主要清除剂，它可能承担来自神经元的α-突触核蛋白的负担（Wolf et al。，2017 ）。在这里，我们描述了使用人α-突触核蛋白单体产生预先形成的原纤维并通过小胶质细胞吞噬作用测量α-突触核蛋白预先形成的原纤维的摄取的方案（Du et al。，2017）。
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| HCV Reporter System (Viral Infection-Activated Split-Intein-Mediated Reporter System) for Testing Virus Cell-to-cell Transmission ex-vivo
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Hepatitis C virus (HCV) spread involves two distinct entry pathways: cell-free transmission and cell-to-cell transmission. Cell-to-cell transmission is not only an efficient way for viruses to spread but also an effective method for escaping neutralizing antibodies. We adapted the viral infection-activated split-intein-mediated reporter system (VISI) and developed a straightforward model for Live-cell monitoring of HCV cell-to-cell transmission ex-vivo: co-culture of HCV infected donor cells (red signal) with uninfected recipient cells (green signal) and elimination of the cell-free transmission by adding potent neutralizing antibody AR3A in the supernatant. With this model, the efficiency of cell-to-cell transmission can be evaluated by counting the number of foci designated by ...
[摘要] 丙型肝炎病毒（HCV）传播涉及两种不同的进入途径：无细胞传播和细胞间传播。 细胞间传播不仅是病毒传播的有效方式，也是逃避中和抗体的有效方法。 我们采用了病毒感染激活的分裂 - 内含肽介导的报告系统（VISI），并开发了一种直接模型，用于活细胞监测HCV细胞间传递离体：共培养 HCV感染的供体细胞（红色信号）与未感染的受体细胞（绿色信号）和通过在上清液中加入有效的中和抗体AR3A消除无细胞的传递。 利用该模型，可以通过计数受体细胞的绿色信号指定的病灶数来评估细胞间传递的效率。
【背景】越来越多的证据证明病毒可以在受感染的组织中使用不同的传播途径（Sattentau，2008; Zhong et al。，2013）。对于HCV传播，无细胞传播和细胞间传播均可介导肝细胞之间的病毒转移。虽然无细胞传播引发HCV感染，但认为细胞 - 细胞传递直接将HCV转移至相邻的肝细胞。它提供了抵抗中和抗体并有助于病毒持久性的极好方法（Brimacombe et al。，2011; Xiao et al。，2014）。之前的文章也证明了一些促进细胞传递的宿主因子，如清道夫受体BI（SR-BI），CD81，紧密连接蛋白claudin-1（CLDN1），Occludin（OCLN），表皮生长因子受体（EGFR）。 （Witteveldt et al。，2009; ...
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