| Functional Evaluation of the Signal Peptides of Secreted Proteins
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] Here, we describe a method that can be used to evaluate the function of predicted signal peptides. This method utilizes the yeast Saccharomyces cerevisiae YTK12 strain and pSUC2 vector in which the pSUC2 vector with fused predicted signal peptide is transformed into yeast. The function of the signal peptides can be evaluated by using different selective media and color reaction. In this protocol, we provide the detailed description of manipulation in order to implement easily.
[摘要] 在这里，我们描述了一种可用于评估预测信号肽功能的方法。 该方法利用酵母酿酒酵母YTK12菌株和pSUC2载体，其中将具有融合的预测信号肽的pSUC2载体转化到酵母中。 信号肽的功能可以通过使用不同的选择性培养基和显色反应来评估。 在这个协议中，我们提供了操作的详细描述以便轻松实现。
【背景】微生物真核生物，如真菌和卵菌，可以分泌丰富的蛋白质来发挥各种功能。目前，从氨基酸序列预测信号肽的最广泛使用的方法是使用软件SignalP（Petersen等人，2011）。酵母YTK12菌株为转化酶阴性，pSUC2载体含有转化酶基因但缺少甲硫氨酸（Met）和信号肽序列，因此YTK12菌株和pSUC2载体广泛用于肽分泌的生物学评价（Jacobs等人 >，1997; Oh等人，2009）。此外，颜色反应可用于验证结果，因为转化酶的酶活性可以通过将2,3,5-三苯基氯化四唑（TTC）还原成不溶性红色1,3,5-三苯甲forma胺（TPF ）。尽管该方法一般用于评估信号肽的功能，但没有关于该方法的具体和详细的信息（Oh等人，2009; Song等人 >，2015）。在这里，我们描述了一种改进的高效酵母转化方法（Gietz和Schiestl，2007）和详细的方案来评估信号肽的功能，这将是分泌蛋白质研究的主要部分。
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| Xenograft Mouse Model of Human Uveal Melanoma
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] Uveal melanoma (UM) is a malignant intraocular tumor in adults. Metastasis develops in almost half of the patients and over 90% of the metastases are in the liver. With the advances in molecular targeting therapy for melanoma, a proper metastasis animal model is of increasing importance for testing the accuracy and effectiveness of systemic therapies. Here, we describe a xenograft model for mimicking human UM liver metastasis by injecting human UM cells into the vitreous cavity in nude mice. The athymic nude mice are immunocompromised and suitable for xenograft tumor growth and metastasis, and intravitreal injection of cells is a quicker and easier operation under a binocular scope, thereby it is simple and effective to test human UM growth and metastasis.
[摘要] 葡萄膜黑色素瘤（UM）是成人中的恶性眼内肿瘤。 几乎一半的患者发生转移，90％以上的转移灶位于肝脏。 随着分子靶向治疗黑色素瘤的进展，正确的转移动物模型对于检测全身治疗的准确性和有效性越来越重要。 在这里，我们描述了一个模仿人类UM肝转移的异种移植模型，通过将人类UM细胞注入裸鼠的玻璃体腔中。 无胸腺裸鼠具有免疫功能低下，适合异种移植瘤的生长和转移，在双眼镜下，玻璃体内注射细胞更快，更容易手术，因此简单有效地检测人类的UM生长和转移。
【背景】UM是成人中最常见的原发性眼内肿瘤，发病率在世界范围内为5至10个/百万（Singh et al。，2011）。几乎一半的患者在初始诊断即使在治疗或/和移除原发性肿瘤后15年内也发生转移（Kujala等人，2003; Weis等人， 2016）。在超过4％的患者中，诊断时已经存在微转移（Finger等人，2005）。这个数字可能会被低估，因为早期的UM检测的限制。目前的药物治疗，例如眼球摘除术，斑块近距离放疗，质子束照射已经成功地去除或抑制早期的局灶性眼内UMs（Dogrusoz等人，2017）。但是一般来说，UM对标准的化学疗法具有抗性，迄今为止还没有有效的全身治疗可用于转移性病变（Goh和Layton，2016; ...
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| Quantification of Triphenyl-2H-tetrazoliumchloride Reduction Activity in Bacterial Cells
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Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] This protocol describes the use of the 2,3,5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride (TTC) salt to evaluate the cell redox potential of rhizobia cells. The production of brightly colored and insoluble 1,3,5-Triphenyltetrazolium formazan arising from TTC reduction is irreversible and can be easily quantified using a spectrophotometer. This protocol allows the production of reproducible results in a relatively short time for Sinorhizobium meliloti 1021 cells grown both in exponential and stationary phases. The results here presented show that the S. meliloti cells deriving from exponential-phase cultures had increased cell redox potential as compared to the ones deriving from stationary-phase cultures. This means that under exponential growth conditions the S. meliloti ...
[摘要] 该方案描述了使用2,3,5-三苯基-2H-四唑氯化物（TTC）盐来评估根瘤细胞的细胞氧化还原电位。由TTC还原产生的鲜色不溶性1,3,5-三苯基四唑甲The的生产是不可逆的，可以使用分光光度计轻松地定量。该方案允许在相对较短的时间内在指数阶段和固定阶段生长的中华根瘤菌中华根瘤菌1021细胞产生可重复的结果。这里提出的结果表明，与来自固定相培养物的细胞相比，从指数阶段培养物得到的猕猴桃细胞具有增加的细胞氧化还原电位。这意味着在指数增长条件下， meliloti 细胞产生更大量的TTC减少所需的还原等同物。
背景 TTC盐是一种水溶性和无色的化合物，可以还原成甲an，高度着色的化合物。甲醛的不可逆形成可以使用分光光度计进行定量。由于其性质和其降低的潜力，该四唑盐广泛用于真核生物和原核生物两者，作为细胞氧化还原活性，活力，药物敏感性和底物利用测定的指标（Byth等人， 2001; Hayashi等人，2003; Raut等人，2008; Lin等人，2008）。由于膜电位，四唑鎓盐的净正电荷有助于细胞摄取，从而允许其细胞内还原（Berridge等人，2005）。在原核生物中，TTC降低的主要研究涉及革兰氏阴性呼吸细菌大肠杆菌，而对Rhizobiacea 家族的成员只有少数研究报道。在这个协议中，这个家族最好的遗传特征成员之一， ...
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