| Neutrophil Extracellular Trap Killing Assay of Candida albicans
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] Fungal pathogen Candida albicans is one of the top leading causes of overall healthcare-associated bloodstream infections worldwide. Neutrophil is the major effector cell to clear C. albicans infection. Our study showed that mouse neutrophils utilize two independent mechanisms to kill C. albicans: one is CR3 downstream NADPH oxidase-dependent mechanism that kills opsonized C. albicans; the other one is dectin-2-mediated NADPH oxidase-independent neutrophil extracellular trap (NET) that kills unopsonized C. albicans. Neutrophil killing of opsonized C. albicans requires phagocytosing the organism and production of reactive oxygen species production (ROS). Most existing protocols that assay for neutrophil killing of C. albicans requires ...
[摘要] [摘要 ] 丰人病原体念珠菌白色念珠菌是顶级领先的原因之一全球总卫生保健相关血流感染。中性粒细胞是清除白色念珠菌感染的主要效应细胞。我们的研究表明，小鼠中性粒细胞利用两种独立的机制杀死白念珠菌：一种是CR3下游NADPH氧化酶依赖性机制，它可以杀死调理过的白色念珠菌。另一个是dectin-2介导的NADPH氧化酶非依赖性中性粒细胞胞外捕获物（NET），它杀死未调理的白色念珠菌。中性粒细胞杀死调理过的白色念珠菌 需要吞噬生物体并产生活性氧（ROS）。大多数现有的协议的测定中性粒细胞杀死白色念珠菌需要使嗜中性粒细胞吞噬生物体后洗涤步骤。根据定义，NET在细胞外杀死生物。因此，重要的是要跳过洗涤步骤，并向孔中添加最佳比例的嗜中性白细胞和白色念珠菌。为了证明NET的作用，有必要比较用微球菌核酸酶（MNase ）（一种消化NET的酶）处理的嗜中性粒细胞的杀伤能力与用热灭活的MNase 处理的嗜中性粒细胞的杀伤能力。MNase 还用于释放与NET绑定的真菌元素以进行计数。该协议可用于测定其他生物膜形成生物的NET杀灭。
[背景 ] ...
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| Contemporaneous Measurement of Outer and Inner Membrane Permeability in Gram-negative Bacteria
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Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] The emergence and rapid spread of multidrug resistance in bacteria have led to the urgent need for novel antibacterial agents. Membrane permeabilization is the mechanism for many antibacterial molecules that are being developed against gram-negative bacteria. Thus, to determine the efficacy of a potential antibacterial molecule, it is important to assess the change in bacterial membrane permeability after treatment. This study describes the protocol for the assays of outer and inner membrane permeability using the fluorescent probes N-phenyl-1-naphthylamine and propidium iodide. Compared with other experiments, such as electron microscopy and the assay of minimal bactericidal concentration, this methodology provides a simpler, faster, and cost-effective way of estimating the ...
[摘要] [摘要 ] 细菌中多药耐药性的出现和迅速扩散导致对新型抗菌剂的迫切需求。膜通透性是许多针对革兰氏阴性细菌的抗菌分子的机制。因此，为了确定潜在的抗菌分子的功效，重要的是评估治疗后细菌膜通透性的变化。这项研究描述了使用荧光探针N-苯基-1-萘胺和碘化丙啶测定外膜和内膜通透性的方案。与其他实验（例如电子显微镜和最小杀菌浓度的测定）相比，该方法提供了一种更简单，更快速且经济高效的方法来评估抗菌分子的膜通透性和杀菌功效。这项研究提出了一种相对于传统方案的优化方案，该方案是在与抗菌测定相同的培养条件下，将细菌与抗菌分子一起孵育，然后在不含肉汤和抗菌分子的缓冲液中检测荧光探针的信号。此协议可避免的效果养分缺乏对细菌的生理状态和抗菌molecul的干扰ES 朝向的F luorescent探针。因此，该方法可以有效，准确地评估膜的渗透性，并与从其他抗菌测定法（如最小抑菌浓度和时间杀灭曲线测定法）获得的结果相匹配。
[背景 ] ...
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| Isolation and Purification of Viruses Infecting Cyanobacteria Using a Liquid Bioassay Approach
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] The following protocol describes the isolation and purification of viruses infecting cyanobacteria using a liquid bioassay approach. Viruses infecting cyanobacteria are also known as cyanophages. This protocol was written specifically for the isolation of cyanophages infecting freshwater cyanobacteria particularly, cyanobacteria that cannot be cultured on solid media. The use of a clonal cyanobacterial culture is recommended for the isolation of viruses. Growth conditions (i.e., media, light cycle and temperature) should be modified based on the host of interest.
[摘要] 以下方案描述了使用液体生物测定方法分离和纯化感染蓝细菌的病毒。 感染蓝细菌的病毒也被称为噬藻体。 本协议是专门为分离感染淡水蓝藻的蓝藻，特别是不能在固体培养基上培养的蓝细菌而编写的。 推荐使用克隆蓝藻培养物来分离病毒。 生长条件（即，介质，光周期和温度）应根据感兴趣的主体进行修改。
【背景】蓝藻是海洋和淡水系统中重要的营养生物。作为其他的水生微生物，蓝藻受到病毒感染（Suttle，2000）。例如，在海洋沿海地区，感染聚球蓝细菌的病毒滴度。 （Suttle和Chan，1993; Waterbury和Valois，1993），可以达到10-5 ml-1，并且基于温度，盐度和宿主丰度而不同。尽管蓝细菌及其病毒（也称为“蓝藻”）具有生态重要性，但只有少数病毒已经从有限的蓝藻菌株中分离出来。因此，通过筛选新的蓝藻菌株来分离新病毒是非常有意义的。以下议定书对于海洋和淡水系统都是相关的，但下面的例子将重点讨论分离和纯化感染淡水蓝藻的病毒（Chénardet al。，2015）。液体生物测定方法优于使用固体基质的公开方案的优点是可以靶向无法耐受噬菌斑测定方法经常使用的较高温度或不能在固体培养基上生长的蓝细菌。
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