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Date:
2015-09-20
[Abstract] Heme is a common cofactor in proteins, found in hemoglobin, myoglobin, cytochrome P450, DGCR8, and nitric oxide synthase, among others. This protocol describes a method for quantifying heme that works best in purified protein samples. This protocol might be used to, for example, determine whether a given heme-binding protein is fully occupied by heme, thus allowing correlation of heme content with activity. This requires the absolute heme concentration and an accurate protein concentration. Another use is to determine the extinction coefficients of a heme-bound protein. This assay is fast, easy, and reproducible if done correctly.
[摘要] 血红素是蛋白质中的常见辅因子，其在血红蛋白，肌红蛋白，细胞色素P450，DGCR8和一氧化氮合酶中发现。该协议描述了用于定量在纯化的蛋白质样品中最佳工作的血红素的方法。该方案可以用于例如确定给定的血红素结合蛋白是否被血红素完全占据，从而允许血红素含量与活性的相关性。这需要绝对血红素浓度和准确的蛋白质浓度。另一个用途是确定血红素结合蛋白的消光系数。如果正确进行，该测定快速，简单和可重复。
[历史背景] G.G.斯托克斯是第一个准备我们现在称为血色素的。早在1863年，他正在监测血红蛋白吸收光谱的变化，血红素还原为Fe（II）形式斯托克斯（1863）。斯托克斯在氨存在下减少了血液;他所看到的是来自与氨络合的血红蛋白的Fe（II）血红素的强烈α和β峰。后来的作者（Anson和Mirsky，1928）能够证明血红素原是由Christian Bohr（Edsall，1972）所调用的，是一种含有一些含氮配体的血红素。它也可以通过在变性条件下简单地还原肌红蛋白而形成，在这种情况下组氨酸用作轴向配体。 Hill证明吡啶血色素由结合还原血红素的轴向位置的两个吡啶分子的氮形成（Hill，1926; Hill，1929）;这由Smith（1959）和Gallagher和Elliot（Gallagher等人，1965; Gallagher等人，1968）证实。
随着光谱学的发展技术，后来的工人能够使用血色素作为重要的分析目的（Hill，1929）。还原的吡啶血色素的α峰的规律性，其高消光系数，以及其在宽范围内遵循比尔定律的事实允许其用于确定样品的总血红素组成。 ...
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