| Purification of N-coronafacoyl Phytotoxins from Streptomyces scabies
|
|
Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] This procedure is used for large-scale purification of N-coronafacoyl phytotoxins that are produced by the potato common scab pathogen Streptomyces scabies. The procedure employs organic extraction of S. scabies culture supernatants under alternating basic and acidic conditions in order to preferentially isolate the phytotoxin - containing carboxylic acid fraction of the supernatant. Preparative thin layer chromatography and semi-preparative reverse phase - high performance liquid chromatography are then used to further purify the individual N-coronafacoyl phytotoxins of interest.
[摘要] 该方法用于大规模纯化由马铃薯常见的痂病原体耻骨链球菌sc疮产生的N， - 海胆酰基植物毒素。 该方法采用有机萃取方法。 在交替的碱性和酸性条件下培养上清液以优先分离含有上清液的含有毒素的羧酸部分。 然后使用制备型薄层色谱法和半制备型反相 - 高效液相色谱法进一步纯化所需的单独的N， - 焦油酰甲酰植物毒素。
马铃薯普通痂病是由革兰氏阳性，丝状，链霉菌属的土壤细菌引起的经济上重要的作物病。第一个描述和最好的特征是痂病引起链霉菌属（Streptomyces spp。）是具有全球分布（Bignell等人，2010）的Streptomyces scabies （syn。 S。scabiei 。目前常见的痂病治理方法包括作物轮作，灌溉和土壤熏蒸;然而，这些策略经常失败，产生不一致的结果或者环境不友好（Dees和Wanner，2012）。为了开发更好的疾病控制策略，我们必须首先了解 S使用的分子机制。 sc疮感染植物并诱发疾病症状。研究表明，S的能力。引起疾病的sc疮是由于在感染过程中产生不同作用的毒力因子。在由s生产的已知或潜在的毒力因子中。 sc疮是植物毒素的家族，被称为具有类似于植物激素茉莉酸的可能起到抑制作用的 N - 角鲨烯酰植物毒素（也称为COR-样代谢产物）病原体感染期间的植物免疫应答（Bignell等人，2010; ...
|
|
|
| Chase Assay of Protein Stability in Haloferax volcanii
|
|
Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Highly regulated and targeted protein degradation plays a fundamental role in almost all cellular processes. Determination of the protein half-life by the chase assay serves as a powerful and popular strategy to compare the protein stability and study proteolysis pathways in cells. Here, we describe a chase assay in Haloferax volcanii, a halophilic archaeon as the model organism.
[摘要] 高度调节和靶向的蛋白质降解在几乎所有的细胞过程中发挥重要作用。通过追踪测定法测定蛋白质半衰期是比较蛋白质稳定性和研究细胞中蛋白水解途径的有力和普遍的策略。在这里，我们描述了作为模型生物体的嗜盐古细菌Haloferax volcanii 中的追踪测定。
背景 在真核生物中，泛素蛋白酶体系统在高选择性和靶向性蛋白水解中起主要作用（Glickman and Ciechanover，2002）。最近的证据表明，小型古细菌泛素样修饰蛋白或SAMPs也起到了蛋白酶体破坏的靶向蛋白的作用（Maupin-Furlow，2014; Anjum等人，2015; Fu et al。 。，2016）。体内蛋白质半衰期的测量提供了研究蛋白水解途径的直接途径。环己酰胺追踪和脉冲追踪测定通常用于监测真核生物中靶向蛋白质的降解（Zhou，2004）。前一种方法用于确定放线菌酮抑制平移伸长后所有细胞蛋白的半衰期;而脉冲追踪测定法测量新合成（脉冲标记）蛋白质的周转率，而不干扰正常的细胞生长。与真核系统相比，确定古细菌中一种给定蛋白质半衰期的快速简便方法尚未明确。因此，我们开发了一种方案，用于测量盐爱好的考古Haloferax volcanii的体内蛋白质稳定性。使用翻译抑制剂（茴香霉素）和转录（放线菌素D）来最小化该古细菌中新蛋白质的合成。 ...
|
|
|
| Acetyl Bromide Soluble Lignin (ABSL) Assay for Total Lignin Quantification from Plant Biomass
|
|
Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Lignin is the second most abundant biopolymer on Earth, providing plants with mechanical support in secondary cell walls and defense against abiotic and biotic stresses. However, lignin also acts as a barrier to biomass saccharification for biofuel generation (Carroll and Somerville, 2009; Zhao and Dixon, 2011; Wang et al., 2013). For these reasons, studying the properties of lignin is of great interest to researchers in agriculture and bioenergy fields. This protocol describes the acetyl bromide method of total lignin extraction and quantification, which is favored among other methods for its high recovery, consistency, and insensitivity to different tissue types (Johnson et al., 1961; Chang et al., 2008; Moreira-Vilar et al., 2014; Kapp et al., ...
[摘要] 木质素是地球上第二大丰富的生物聚合物，为植物在二次细胞壁提供机械支持，防止非生物和生物胁迫。然而，木质素还可以作为生物燃料生成的糖化的障碍（Carroll和Somerville，2009; Zhao和Dixon，2011; Wang等人，2013）。由于这些原因，研究木质素的性质对于农业和生物能源领域的研究人员非常感兴趣。该方案描述了总木素提取和定量的乙酰溴方法，其对于其不同组织类型的高回收率，一致性和不敏感性的其它方法是有利的（Johnson等人，1961; Chang < em等人，2008;="" moreira-vilar等人，2014;="">
背景 用于从植物生物量定量木质素的乙酰溴方法已被用于精确测量几十年的总木质素含量（Johnson等，1961）。最近，与替代的巯基乙酸和Klason木质素方法（Moreira-Vilar等人，2014））相比，该方法获得了木质素定量的最佳方法的支持。这三种方法的比较经验证明，乙酰溴方法一直导致木质素回收率最高，对组织类型，木质化程度和木质素组成不敏感（Moreira-Vilar等人）。 ...
|
|
|