| An in vitro Co-culture System for the Activation of CD40 by Membrane-presented CD40 Ligand versus Soluble Agonist
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] One fundamental property of the TNR receptor (TNFR) family relates to how ‘signal quality’ (the extent of receptor ligation or cross-linking) influences the outcome of receptor ligation, for instance the induction of death in tumour cells. It is unequivocal that membrane-presented ligand (delivered to target cells via cell-surface presentation by co-culture with ligand-expressing third-party cells) induces a greater extent of carcinoma cell death in vitro in comparison to non-cross-linked agonists (agonistic antibodies and/or recombinant ligands). The CD40 receptor epitomises this fundamental property of TNF receptor-ligand interactions, as the extent of CD40 cross-linking dictates cell fate. Membrane-presented CD40 ligand (mCD40L), but not soluble agonists (e.g., ...
[摘要] TNR受体（TNFR）家族的一个基本特性涉及“信号质量”（受体连接或交联的程度）如何影响受体连接的结果，例如肿瘤细胞中的死亡诱导。毫无疑问，膜呈递配体（通过与表达配体的第三方细胞共培养通过细胞表面呈递递送至靶细胞）在体外诱导更大程度的癌细胞死亡非交联激动剂（激动性抗体和/或重组配体）。 CD40受体集中体现了TNF受体 - 配体相互作用的这种基本特性，因为CD40交联的程度决定了细胞命运。膜呈递CD40配体（mCD40L），但不是可溶性激动剂（例如，激动性抗CD40抗体），诱导高水平的促炎细胞因子分泌并导致恶性肿瘤细胞广泛死亡（细胞凋亡）但不是正常的）上皮细胞。在本文中，我们描述了通过mCD40L激活CD40并随后检测细胞凋亡的各种特征（包括细胞膜透化，DNA片段化，半胱天冬酶活化）以及细胞内细胞死亡介质检测的共培养系统（包括衔接蛋白，促凋亡激酶和活性氧，ROS）。
【背景】TNFR及其配体在调节淋巴组织以及上皮（尤其是癌）细胞中的细胞增殖或死亡中的作用已经在广泛研究中，因为它们诱导细胞死亡（主要通过细胞凋亡）的能力代表了有希望的目标。用于癌症治疗。然而，重要的是，当以可溶性对膜结合形式存在时，TNFR激动剂引发细胞死亡的能力存在明显差异。当作为单独治疗施用时，可溶性激动剂通常表现出相对低的细胞毒性效力，而膜呈递的配体似乎是优越的（Albarbar ...
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| Isolation of Particles of Recombinant ASC and NLRP3
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Author:
Date:
2015-05-20
[Abstract] NLRP3 inflammasome is a multiprotein complex responsible for the activation of inflammatory caspase-1, resulting in processing and release of pro-inflammatory cytoquines IL-1β and IL-18 (Schroder and Tschopp, 2010). This inflammasome is composed of the sensor protein NLRP3 connected to caspase-1 through the adaptor protein ASC (apoptosis-associated speck-like protein with a caspase-recruitment domain) (Schroder and Tschopp, 2010). We and others have reported that upon inflammasome activation functional oligomeric inflammasome particles of NLRP3 and ASC were released from cells, acting as danger signals to amplify inflammation by promoting the activation of caspase-1 extracellularly (Baroja-Mazo et al., 2014; Franklin et al., 2014).
Studying the extracellular ...
[摘要] NLRP3炎症小体是负责炎症半胱天冬酶-1活化的多蛋白复合物，导致促炎细胞因子IL-1β和IL-18的加工和释放（Schroder和Tschopp，2010）。这种炎症小体由通过衔接蛋白ASC（凋亡相关的斑点样蛋白与半胱氨酸蛋白酶募集结构域）连接到caspase-1的传感蛋白NLRP3组成（Schroder和Tschopp，2010）。我们和其他人已经报道，在炎症小体激活时，NLRP3和ASC的功能性寡聚炎症小体颗粒从细胞中释放，充当危险信号，通过促进细胞外caspase-1的活化来扩增炎症（Baroja-Mazo等，
通过纯化ASC的重组颗粒或组成型激活的NLRP3突变体来研究寡聚ASC和NLRP3炎症小体颗粒的细胞外功能是可能的与相关的cryopyrin相关周期性综合征（CAPS，突变p.D303N），都标记有黄色荧光蛋白（YFP），并在HEK293细胞中表达。通过重组ASC或突变体NLRP3在HEK293细胞中的表达导致它们自发聚集成斑点（Baroja-Mazo等人，2014）的事实促进了纯化过程，并且方案最初从Fernandes-Alnemri和Alnemri（2008年）。
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