| A Streamlined Method for the Preparation of Gelatin Embedded Brains and Simplified Organization of Sections for Serial Reconstructions
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Gelatin embedding of whole brains for sectioning is a critical procedure used in neuroscience to ensure all morphological and spatial details are preserved intact. Here, we describe an inexpensive, reproducible and efficient means to embed post-fixed brains ready for sectioning in gelatin within a week’s time. The sections obtained are distortion-free and their fragile internal structures preserved which can be used for serial reconstructions for lesion studies and mapping of viral expression after stereotaxic injections. In addition, the separation of adjacent slices into a series of 3-4 vials facilitates subsequent organization and assembly of serial sections at the mounting step.
[摘要] 整个脑切片明胶嵌入是神经科学中使用的关键程序，以确保所有的形态和空间的细节保存完好。 在这里，我们描述了一个廉价，可重复和有效的方法来嵌入后固定的大脑准备切片明胶一个星期的时间。 获得的部分是无畸变的，它们的脆弱内部结构被保留下来，可用于系列重建病变研究和立体定位注射后的病毒表达图谱。 此外，将相邻切片分离成3-4个小瓶系列便于在安装步骤中对连续切片进行组织和组装。
【背景】行为神经科学的最新进展已经允许将视蛋白和抗体靶向毒素引入特定亚群的神经元和大脑区域。这些研究通常需要全脑切片的可视化用于组织学和形态学分析，以通过用于行为验证的立体定位注射（Aoki等，，2015）或引言定位细胞类型特异性抗体靶向毒素诱导的损伤的病毒递送转基因（Aquili等人，2014）。利用狂犬病病毒（Suzuki等人，2012）对神经元回路进行了详细的绘图，并且使用明胶作为包埋剂实现了连续切片的定位调查，所述包埋剂作为组织内和周围的结构基质。明胶浸渍的脑组织提供了加强的支持精致的内部结构，如海马和脑室空间，这是容易损坏免疫组织化学（IHC）处理和随后安装到幻灯片上。嵌入式脑切片在安装时通常也不会变形，并且可以将相邻切片用于连续重建。
凝胶嵌入和IHC处理后的质量取决于几个程序性的细节，这可能是乏味和耗时的。在先前公开的方案中，明胶向脑和心室空间的适当渗透和渗透需要真空烘箱（Griffioen等，1992）。此外，将大脑嵌入小模具中是具有挑战性的，因为大脑具有漂浮的趋势。另外，在连续重构的IHC处理之后识别和定向相邻切片可能是艰巨的。 ...
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| Isolation and Analysis of Proteoglycans and Glycosaminoglycans from Archaeological Bones and Teeth
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] We have developed methods for isolating proteoglycans and glycosaminoglycans from archaeological bones and teeth. These methods have been previously published (Coulson-Thomas et al., 2015) and are described here in more detail. In the case of glycosaminoglycans, the method was a previously described method (Nader et al., 1999) which we optimized for archeological samples.
[摘要] 我们开发了从考古学骨骼和牙齿中分离蛋白聚糖和糖胺聚糖的方法。 以前已经公开了这些方法（Coulson-Thomas等人，2015），并且在这里更详细地描述。 在糖胺聚糖的情况下，该方法是先前描述的方法（Nader等人，1999），其针对考古样品进行了优化。
【背景】骨组织主要由矿物成分（羟基磷灰石）和由胶原，非胶原蛋白和蛋白聚糖（PG）组成的有机基质组成。 由于与羟基磷灰石紧密结合，细胞外基质蛋白和PG被保护免受死亡后温度和化学药剂的破坏作用。 然而，到目前为止，只有DNA和蛋白质已经从考古学骨骼中成功提取，因此我们开发了从考古学骨骼和牙齿中分离PG和糖胺聚糖（GAG）链的方法。 PGs和GAG在骨形态发生，体内平衡和退行性骨病中起主要作用，从考古骨骼分析这些分子将揭示有价值的古生物学信息。
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| The Use of a Dexamethasone-inducible System to Synchronize Xa21 Expression to Study Rice Immunity
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Author:
Date:
2015-05-05
[Abstract] Inducible gene expression systems offer researchers the opportunity to synchronize target gene expression at particular developmental stages and in particular tissues. The glucocorticoid receptor (GR), a vertebrate steroid receptor, has been well adopted for this purpose in plants. To generate steroid-inducible plants, a construct of GAL4-binding domain-VP16 activation domain-GR fusion (GVG) with the target gene under the control of upstream activation sequence (UAS) has been developed and extensively used in plant research.
Immune receptors perceive conserved molecular patterns secreted by pathogens and initiate robust immune responses. The rice immune receptor, XA21, recognizes a molecular pattern highly conserved in all sequenced genomes of Xanthomonas, ...
[摘要] 诱导型基因表达系统为研究人员提供了在特定发育阶段，特别是组织中同步靶基因表达的机会。糖皮质激素受体（GR），一种脊椎动物类固醇受体，已经在植物中被很好地用于此目的。为了产生类固醇诱导的植物，已经开发了在上游激活序列（UAS）控制下具有靶基因的GAL4结合结构域-VP16激活结构域-GR融合（GVG）的构建体，并广泛用于植物研究中。
免疫受体感知由病原体分泌的保守分子模式，并启动强烈的免疫应答。水稻免疫受体，XA21 识别在所有测序的黄单胞菌属的基因组中高度保守的分子模式，并且赋予对X的强抗性。 oryzae pv。 oryzae （ Xoo ）。然而，鉴定XA21 下游的基因受到限制性损伤的阻碍，因此在表达Xa21 的植物中限制了防御反应区域。诱导型表达允许跨大量水稻组织的同步免疫应答，非常适合通过全基因组方法（例如转录组学和蛋白质组学）研究XA21 介导的免疫。在该协议中，我们描述了使用该GVG系统来同步 Xa21 表达。
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