| Evaluation of Cross-presentation in Bone Marrow-derived Dendritic Cells in vitro and Splenic Dendritic Cells ex vivo Using Antigen-coated Beads
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Antigen presentation by MHC class I molecules, also referred to as cross-presentation, elicits cytotoxic immune responses. In particular, dendritic cells (DC) are the most proficient cross-presenting cells, since they have developed unique means to control phagocytic and degradative pathways.
This protocol allows the evaluation of antigen cross-presentation both in vitro (by using bone marrow-derived DC) and ex vivo (by purifying CD8+ DC from spleen after incorporation of particulate antigen) using ovalbumin (OVA)-coupled particles. Cross-presentation efficiency is measured by three different readouts: the B3Z hybridoma T cell line (Karttunen et al., 1992) and stimulation of antigen-specific CD8+ T cells (OT-I) (Kurts et al ...
[摘要] 通过MHC I类分子的抗原呈递，也称为交叉呈递，引起细胞毒性免疫应答。特别地，树突细胞（DC）是最熟练的交叉呈递细胞，因为它们已经开发了控制吞噬和降解途径的独特手段。 <此协议允许在体外（通过使用骨髓衍生的DC）和离体（通过纯化CD8 + ）评价抗原交叉呈递。 （OVA）偶联的颗粒后，来自脾脏的DC/DC结合颗粒抗原）。通过三种不同的读数测量交叉呈递效率：B3Z杂交瘤T细胞系（Karttunen等人，1992）和抗原特异性CD8 + T细胞的刺激OT-I）（Kurts等人，1996），在用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记它们之后分析CD69表达或OT-I增殖的OT-I活化。通过使用这种方法，我们可以最近显示DCs能够在TLR4结合时瞬时增加交叉表达效率（Alloatti等人，2015）。 [背景] 在小鼠中，抗原呈递细胞（APC）能够吸收外源抗原以加工它们，并将源自这些外源抗原的肽加载到主要组织相容性复合体（MHC）I类分子上。肽-MHC I复合物随后被转运到质膜，在那里它们可以呈递到CD8 + T细胞，从而促进T细胞活化，这被称为交叉呈递（Joffre等人， al 。，2012）。在不同的APC中，树突状细胞（DC）在交叉呈递方面表现优异，并且包含表达XCR1标记的不同亚群，其已经显示非常有效地交叉呈递抗原（即CD8 + 来自脾的DC和来自皮肤和肺的CD103 ...
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| Isolation and in vivo Transfer of Antigen Presenting Cells
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Author:
Date:
2014-10-05
[Abstract] Transfer of antigen presenting cells in vivo is a method used by immunologists to examine the potency of antigen presentation by a selected population of cells. This method is most commonly used to analyze presentation of protein antigens to MHC class I or II restricted T cells, but it can also be used for studies of nonconventional antigens such as CD1-presented lipids. In a recent study focusing on CD1d-restricted glycolipid antigen presentation to Natural Killer T cells, we compared antigen presenting properties of splenic B cells, CD8αPos dendritc cells (DCs) and CD8αNeg DCs (Arora et al., 2014). This protocol describes the detailed method used for isolation of these cell populations, and their transfer into recipient mice to analyze their ...
[摘要] 体内转移抗原呈递细胞是免疫学家用来检查所选择的细胞群体的抗原呈递效力的方法。该方法最常用于分析蛋白质抗原对MHC I类或II类限制性T细胞的呈递，但其也可用于非常规抗原如CD1呈递脂质的研究。在最近关于CD1d限制性糖脂抗原呈递到天然杀伤T细胞的研究中，我们比较脾B细胞，CD8αpos 树突细胞（DC）和CD8α Neg sup> DC（Arora et al。，2014）。该方案描述了用于分离这些细胞群体和将其转移到受体小鼠中以分析其抗原呈递性质的详细方法。作为总单核细胞的百分比，平均脾脏含有约1-3％骨髓树突状细胞（DC）。在绝对数量上，这转换为大约0.6-1.8×10 6个DC。为了增强脾中DC的数目，向小鼠皮下注射来自经过工程改造以表达fms相关的酪氨酸激酶3配体（Flt3L）的培养的黑素瘤细胞系（B16.Flt3L）的细胞（Mach等人。，2000）。该蛋白是与集落刺激因子-1同源的生长因子，并在造血干细胞的分化中起关键作用。将这种蛋白质作为纯化的蛋白质施用到小鼠中导致多个器官中的CD8αpos pos和CD8α阳性DC亚群的扩增。在已经植入过表达这种蛋白质的肿瘤细胞的小鼠中也观察到类似的扩增（Mach等人，2000）。根据我们的经验，来自具有可触知的B16.Flt3L肿瘤的小鼠的脾脏中高达60％的总单核细胞可以是CD11c阳性树突细胞，从而得到高达5×10 ...
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