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Centrifuge 5427 R

离心机5427 R

Company: Eppendorf
Catalog#: 5427 R
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Isothermal Titration Calorimetry: A Biophysical Method to Characterize the Interaction between Label-free Biomolecules in Solution
Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract]  This protocol can be applied to analyze the direct interaction between a soluble protein and a target ligand molecule using Isothermal Titration Calorimetry (ITC, Malvern). ITC allows the biophysical characterization of binding between label-free, non-immobilized and in-solution biomolecules by providing the stoichiometry of the interaction, the equilibrium binding constants and the thermodynamic parameters. ITC monitors heat changes (released and/or absorbed) caused by macromolecular interactions with no restrictions of buffer and molecular weight of the macromolecules. [摘要]  该方案可用于使用等温滴定量热法(ITC,Malvern)分析可溶性蛋白质和靶配体分子之间的直接相互作用。 ITC允许通过提供相互作用的化学计量,平衡结合常数和热力学参数来对无标记,非固定和溶液内生物分子之间的结合进行生物物理表征。 ITC监测由大分子相互作用引起的热变化(释放和/或吸收),而不限制大分子的缓冲液和分子量。

【背景】大分子相互作用是关键的细胞事件,因为它们形成信号转导途径的基础。因此,大分子相互作用是研究的重要领域,因为它们允许更深入地理解作为生理学和病理生理学过程基础的分子机制,以及能够调节引起疾病的大分子结合事件的药物的合理设计。

在这种情况下,等温滴定量热法(ITC)是一种用于表征大分子相互作用的强大技术。 ITC确定两个分子结合时发生的热变化。可以吸收热量(吸热反应)或释放(放热反应)。 ITC通过确定由仪器的加热器提供给参比和样品池的差异功率来监测这种热变化,这是在结合反应期间抵消两个电池之间的任何温差所需的,使得参考之间没有温度差异。和样品细胞(图1)。

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High Resolution Melting Temperature Analysis to Identify CRISPR/Cas9 Mutants from Arabidopsis
Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract]  CRISPR/Cas9 made targeted mutagenesis and genome editing possible for many plant species. One of the ways that the endonuclease is used for plant genetics is the creation of loss-of-function mutants, which typically result from erroneous DNA repair through non-homologous end joining (NHEJ) pathway. The majority of erroneous repair events results in single-bp insertion or deletion. While single-bp insertions or deletions (indels) effectively destroy the function of protein-coding genes through frameshift, detection is difficult due to the small size shift. High-resolution melting temperature analysis allows quick detection, and it does not require any additional pipetting steps after the PCR amplification of the region of interest. In this protocol, we will describe the steps required for ... [摘要]  CRISPR / Cas9可以对许多植物物种进行定向诱变和基因组编辑。 内切核酸酶用于植物遗传学的方法之一是产生功能丧失突变体,其通常由通过非同源末端连接(NHEJ)途径的错误DNA修复引起。 大多数错误的修复事件导致单bp插入或缺失。 虽然单bp插入或缺失(插入缺失)通过移码有效地破坏蛋白质编码基因的功能,但由于小的移位,检测很困难。 高分辨率熔解温度分析允许快速检测,并且在PCR扩增感兴趣区域后不需要任何额外的移液步骤。 在该方案中,我们将描述分析潜在的纯合突变体所需的步骤。

【背景】CRISPR / Cas9核酸酶是一种核糖核蛋白,能够在特定的22个核苷酸序列上切割DNA双链。与其他核酸酶(例如锌指核酸酶和转录激活因子样效应核酸酶(TALEN))相比,CRISPR / Cas9系统的主要优点在于序列特异性由RNA赋予,并且不需要针对每种靶序列的单独蛋白质。这大大降低了成本,单个构造可以定位多达32个目标。由于这种低成本和高效率,CRISPR / Cas9系统现在广泛用于许多植物物种(Baltes和Voytas,2015; Belhaj et al。,2015)。

当CRISPR / Cas9诱导的双链DNA断裂被NHEJ途径错误修复时,修复的序列最常导致小插入缺失,其中一个bp插入缺失是最常见的(Ma et al。,2015; ...

Primary Cultures from Human GH-secreting or Clinically Non-functioning Pituitary Adenomas
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract]  Pituitary adenomas are among the more frequent intracranial tumors usually treated with both surgical and pharmacological–based on somatostatin and dopamine agonists–approaches. Although mostly benign tumors, the occurrence of invasive behaviors is often detected resulting in poorer prognosis. The use of primary cultures from human pituitary adenomas represented a significant advancement in the knowledge of the mechanisms of their development and in the definition of the determinants of their pharmacological sensitivity. Moreover, recent studies identified also in pituitary adenomas putative tumor stem cells representing, according to the current hypothesis, the real cellular targets to eradicate most malignancies. In this protocol, we describe the procedure to establish primary cultures ... [摘要]  垂体腺瘤是更常见的颅内肿瘤之一,通常用基于生长抑素和多巴胺激动剂手术的手术和药物治疗。 虽然多为良性肿瘤,但侵入性行为的发生常常被检测到,导致预后较差。 来自人类垂体腺瘤的原代培养物的使用代表了对其发育机制的知识以及其药理敏感性决定因素的定义方面的显着进步。 此外,最近的研究也在垂体腺瘤中发现了假定的肿瘤干细胞,根据目前的假设,它代表了根除大多数恶性肿瘤的真实细胞靶标。 在这个协议中,我们描述了从人垂体腺瘤建立原代培养的程序,以及如何选择,体外扩增和表型鉴定推定的垂体腺瘤干细胞。

【背景】垂体腺瘤是最常见的颅内肿瘤之一(高达15%),横断面研究发现每100,000名居民中约有90例发病,其中绝大多数为30岁以上的成年人。大约10%的未经选择的垂体在尸检时进行了检查(即考虑到之前未诊断为垂体疾病的受试者的垂体)( ,Molitch,2017)。尽管通常为良性肿瘤,但垂体腺瘤的处理可因与激素分泌过多相关的临床综合征或发展以治疗抗性,高增殖率,快速复发和绒毛外侵袭为特征的侵袭行为而复杂化(Carreno等人,2017)。成年垂体干细胞的持续存在(Florio,2011)导致垂体腺瘤(以及可能的其他良性瘤形成)的发展可以源自具有干细胞特性(主要是自我更新和分化)的肿瘤细胞的亚群能力),正如已经建立的恶性固体和血液肿瘤一样。

最近的实验证据表明,癌症干细胞(CSC)范例也适用于人和小鼠垂体腺瘤(Donangelo等人,2014; ...

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