| An in vitro Co-culture System for the Activation of CD40 by Membrane-presented CD40 Ligand versus Soluble Agonist
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] One fundamental property of the TNR receptor (TNFR) family relates to how ‘signal quality’ (the extent of receptor ligation or cross-linking) influences the outcome of receptor ligation, for instance the induction of death in tumour cells. It is unequivocal that membrane-presented ligand (delivered to target cells via cell-surface presentation by co-culture with ligand-expressing third-party cells) induces a greater extent of carcinoma cell death in vitro in comparison to non-cross-linked agonists (agonistic antibodies and/or recombinant ligands). The CD40 receptor epitomises this fundamental property of TNF receptor-ligand interactions, as the extent of CD40 cross-linking dictates cell fate. Membrane-presented CD40 ligand (mCD40L), but not soluble agonists (e.g., ...
[摘要] TNR受体（TNFR）家族的一个基本特性涉及“信号质量”（受体连接或交联的程度）如何影响受体连接的结果，例如肿瘤细胞中的死亡诱导。毫无疑问，膜呈递配体（通过与表达配体的第三方细胞共培养通过细胞表面呈递递送至靶细胞）在体外诱导更大程度的癌细胞死亡非交联激动剂（激动性抗体和/或重组配体）。 CD40受体集中体现了TNF受体 - 配体相互作用的这种基本特性，因为CD40交联的程度决定了细胞命运。膜呈递CD40配体（mCD40L），但不是可溶性激动剂（例如，激动性抗CD40抗体），诱导高水平的促炎细胞因子分泌并导致恶性肿瘤细胞广泛死亡（细胞凋亡）但不是正常的）上皮细胞。在本文中，我们描述了通过mCD40L激活CD40并随后检测细胞凋亡的各种特征（包括细胞膜透化，DNA片段化，半胱天冬酶活化）以及细胞内细胞死亡介质检测的共培养系统（包括衔接蛋白，促凋亡激酶和活性氧，ROS）。
【背景】TNFR及其配体在调节淋巴组织以及上皮（尤其是癌）细胞中的细胞增殖或死亡中的作用已经在广泛研究中，因为它们诱导细胞死亡（主要通过细胞凋亡）的能力代表了有希望的目标。用于癌症治疗。然而，重要的是，当以可溶性对膜结合形式存在时，TNFR激动剂引发细胞死亡的能力存在明显差异。当作为单独治疗施用时，可溶性激动剂通常表现出相对低的细胞毒性效力，而膜呈递的配体似乎是优越的（Albarbar ...
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| Isolation and FACS Analysis on Mononuclear Cells from CNS Tissue
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Author:
Date:
2014-09-20
[Abstract] Immune cells, such as microglia are resident in the brain and spinal cord of normal mice and humans. Furthermore, macrophages, dendritic cells, T cells, B cells and NK cells infiltrate the CNS during certain infections or in neurodegenerative/neuroinflammatory diseases, such as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) (a model for multiple sclerosis) or Alzheimer’s disease (Sutton et al., 2009; Browne et al., 2013). Infiltrating cells can be identified using immunohistological staining of sections from brain or spinal cords. However, more detailed phenotypic and functional analysis is possible following isolation of the immune cells from the CNS of normal or diseased mice. Purification of mononuclear cells from brain or spinal cord is dependent on perfusing the ...
[摘要] 免疫细胞，例如小神经胶质细胞存在于正常小鼠和人的脑和脊髓中。此外，巨噬细胞，树突细胞，T细胞，B细胞和NK细胞在某些感染或神经变性/神经炎症疾病如实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）（多发性硬化症模型）或阿尔茨海默病（Sutton >等人，2009; Browne等人，2013）。可以使用来自脑或脊髓的切片的免疫组织学染色来鉴定浸润细胞。然而，在从正常或患病小鼠的CNS中分离免疫细胞后，可能进行更详细的表型和功能分析。来自脑或脊髓的单核细胞的纯化取决于灌注小鼠以确保在离解组织和在Percoll梯度上纯化单核细胞之前从CNS组织中除去血液。该技术提供了具有高存活力的细胞的单细胞悬浮液，其适合于FACS分析或有限的功能研究。产率通常低于正常小鼠脑或脊髓，但从具有EAE或CNS感染的小鼠的产量更高。当与细胞内细胞因子染色和FACS组合时，该技术特别用于分析致病性T细胞（Th17和Th1细胞）及其在EAE中的调节/调节。
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