| Ex vivo Ooplasmic Extract from Developing Drosophila Oocytes for Quantitative TIRF Microscopy Analysis
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Understanding the dynamic behavior and the continuously changing composition of macromolecular complexes, subcellular structures and organelles is one of areas of active research in both cell and developmental biology, as these changes directly relate to function and subsequently to the development and homeostasis of the organism. Here, we demonstrate the use of the developing Drosophila oocyte to study dynamics of messenger ribonucleoprotein complexes (mRNPs) with high spatiotemporal resolution. The combination of Drosophila genetics with total internal reflection (TIRF) microscopy, image processing and data analysis gives insight into mRNP motility and composition dynamics with unprecedented precision.
[摘要] 了解大分子复合物，亚细胞结构和细胞器的动态行为和不断变化的组成是细胞和发育生物学中积极研究的领域之一，因为这些变化与功能和随后的生物体的发育和稳态直接相关。 在这里，我们演示了使用发展中的果蝇卵母细胞来研究具有高时空分辨率的信使核糖核蛋白复合物（mRNPs）的动力学。 果蝇的遗传学与全内反射（TIRF）显微镜，图像处理和数据分析结合，以前所未有的精确度了解了mRNP的运动性和组成动力学。
【背景】细胞内运输是活细胞的基本过程之一。几乎细胞内的所有细胞 - 离子，分子，复合物，细胞器 - 被积极地传输，使局部熵减少。尽管近年来，我们对这些运输过程的机理有了很大的了解，但我们的大部分知识来自于体外和细胞培养研究。在这些简化的系统中，很难确定是否利用运输监管流程的全部潜力。另一方面，组织，器官，组织和生物体通常太复杂，无法有效地研究时空分辨率，足以匹配这些运输过程的规模。为了结合自下而上和自上而下的方法的优点，已经开发了在保持复杂性的同时，使这些过程更易于访问的技术。一个例子是从ambiphian（例如，非洲爪蟾）卵母细胞和胚胎中制备大量细胞质提取物来研究细胞分裂（Lohka和Masui，1983; Murray，1991; Sawin和Mitchison，1991）。我们最近显示，在细胞质液滴 - ...
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| Determination of the Predatory Capability of Bdellovibrio bacteriovorus HD100
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Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Bdellovibrio bacteriovorus HD100 is an obligate predator that preys upon a wide variety of Gram negative bacteria. The biphasic growth cycle of Bdellovibrio includes a free-swimming attack phase and an intraperiplasmic growth phase, where the predator replicates its DNA and grows using the prey as a source of nutrients, finally dividing into individual cells (Sockett, 2009). Due to its obligatory predatory lifestyle, manipulation of Bdellovibrio requires two-member culturing techniques using selected prey microorganisms (Lambert et al., 2003). In this protocol, we describe a detailed workflow to grow and quantify B. bacteriovorus HD100 and its predatory ability, to easily carry out these laborious and time-consuming techniques.
[摘要] HDD是一种专有捕食者，可以用于各种革兰氏阴性菌。 Bdellovibrio的双相生长周期包括自由游泳攻击阶段和胞内生长期，其中捕食者复制其DNA并使用猎物作为营养源，最终分成单个细胞（Sockett ，2009）。由于其必要的掠夺性生活方式，使用选择的猎物微生物（Lambert等人，2003）的双重培养技术的操作需要Bdellovibrio 。在这个协议中，我们描述了一个详细的工作流程来增长和量化。细菌性HD100及其掠夺能力，轻松实施这些费时费力的技术。
在过去几年中，Bdellovibrio 已经吸引了科学界的兴趣，并且已经开发了若干应用，如进化研究（Davidov和Jurkevitch，2009），鉴定新的生物催化剂（Martínezet al。 （2012）），治疗应用（Atterbury等人，2011），或使用Bdellovibrio的生物技术应用作为回收附加值的溶解剂细胞内生物产物（Martínez等人，2016）。由于对Bdellovibrio 的兴趣日益增加，已经开发了用于量化这种掠食性细菌的不同间接方法（Mahmoud等人，2007; Lambert和Sockett，2008; Van Essche et al。，2009）。然而，通过双层方法直接量化B。o is is is is is is is is is to to to to ...
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| VLA-4 Affinity Assay for Murine Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells
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Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] Hematopoietic stem cells (HSCs) are defined by their functional ability to self-renew and to differentiate into all blood cell lineages. The majority of HSC reside in specific anatomical locations in the bone marrow (BM) microenvironment, in a quiescent non motile mode. Adhesion interactions between HSCs and their supporting BM microenvironment cells are critical for maintaining stem cell quiescence and protection from DNA damaging agents to prevent hematology failure and death. Multiple signaling proteins play a role in controlling retention and migration of bone marrow HSCs. Adhesion molecules are involved in both processes regulating hematopoiesis and stem- and progenitor-cell BM retention, migration and development. The mechanisms underlying the movement of stem cells from and to the ...
[摘要] 造血干细胞（HSC）由其自我更新的功能能力定义，并分化成所有血细胞谱系。大多数HSC位于骨髓（BM）微环境中的特定解剖位置，处于静止非运动模式。 HSCs与其支持的BM微环境细胞之间的粘附相互作用对于维持干细胞静止和保护免受DNA损伤因子阻止血液学失败和死亡至关重要。多重信号蛋白在控制骨髓HSCs的保留和迁移中起重要作用。粘附分子参与调节造血和干细胞和祖细胞BM保留，迁移和发育的两个过程。干细胞从骨髓移动到骨髓的机制尚未完全阐明，仍然是深入研究的对象。一个重要的方面是修饰干细胞保留，迁移和发育所需的干细胞和祖细胞的粘附分子的表达和亲和力。粘附力通过粘附分子的表达，亲和力和亲合力来调节。亲和力调节与分子结合识别和结合强度有关。在这里，我们描述了在我们的研究中使用的体外 FACS测定来研究整联蛋白α4亚类β1亚单位的表达，亲和力和功能也称为VLA-4）用于小鼠骨髓保留EPCR +长期复制HSC（LT-HSC）（Gur-Cohen等人，2015）。背景整合素是介导细胞和细胞 - ...
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