| RI-SEC-seq: Comprehensive Profiling of Nonvesicular Extracellular RNAs with Different Stabilities
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Exosomes and other extracellular vesicles (EVs) are considered the main vehicles transporting RNAs in extracellular samples, including human bodily fluids. However, a major proportion of extracellular RNAs (exRNAs) do not copurify with EVs and remain in ultracentrifugation supernatants of cell-conditioned medium or blood serum. We have observed that nonvesicular exRNA profiles are highly biased toward those RNAs with intrinsic resistance to extracellular ribonucleases. These highly resistant exRNAs are interesting from a biomarker point of view, but are not representative of the actual bulk of RNAs released to the extracellular space. In order to understand exRNA dynamics and capture both stable and unstable RNAs, we developed a method based on size-exclusion chromatography (SEC) ...
[摘要] [摘要]外来体和其他细胞外囊泡（EVs）被认为是在细胞外样品（包括人体液）中运输RNA的主要载体。但是，大部分细胞外RNA（exRNA ）不能与EV共纯化，而是保留在细胞条件培养基或血清的超速离心上清液中。我们已经观察到非囊泡的exRNA概况高度偏向那些对细胞外核糖核酸酶具有固有抗性的RNA。从生物标志物的角度来看，这些高度抗性的exRNA很有趣，但不能代表释放到细胞外空间的RNA的实际体积。为了了解exRNA动态并捕获稳定和不稳定的RNA，我们开发了一种基于大小排阻色谱（SEC）分馏的RNase抑制剂（RI）处理的细胞条件培养基（RI-SEC-seq）的方法。这种方法使我们能够鉴定和研究细胞外核糖体和tRNA，并提供了可以在不久的将来影响生物标志物发现的细胞外RNAome的动态视图。
图形概要：
所述RI-SEC-SEQ协议的概述：大小排阻层析的级分的测序从nonvesicular胞样品用或不用RNA酶抑制剂（+/- RI）
[背景]细胞外RNA（exRNA ）参与细胞间通讯，并且在微创液体活检中有望成为疾病的生物标志物（O'Brien et ...
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| Generation of the Compression-induced Dedifferentiated Adipocytes (CiDAs) Using Hypertonic Medium
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Current methods to obtain mesenchymal stem cells (MSCs) involve sampling, culturing, and expanding of primary MSCs from adipose, bone marrow, and umbilical cord tissues. However, the drawbacks are the limited numbers of total cells in MSC pools, and their decaying stemness during in vitro expansion. As an alternative resource, recent ceiling culture methods allow the generation of dedifferentiated fat cells (DFATs) from mature adipocytes. Nevertheless, this process of spontaneous dedifferentiation of mature adipocytes is laborious and time-consuming. This paper describes a modified protocol for in vitro dedifferentiation of adipocytes by employing an additional physical stimulation, which takes advantage of augmenting the stemness-related Wnt/β-catenin signaling. Specifically, this ...
[摘要] [摘要]目前的方法，以获得间充质干细胞（MSC）包括采样，培养，和扩大主要由脂肪，骨髓，和脐带组织的MSCs。然而，缺点是在总细胞在MSC池，和它们的衰减干性的数量有限在维生素- [R Ò扩张。作为替代资源，最近的天花板培养方法允许从成熟的脂肪细胞中生成去分化的脂肪细胞（DFAT）。然而，这种成熟脂肪细胞自发去分化的过程既费力又费时。本文描述了一种用于经修改协议在体外通过采用附加的物理刺激，其中脂肪细胞去分化TA KES扩充所述干性相关的优点的Wnt /β-catenin信号。具体来说，该协议利用含聚乙二醇（PEG）的高渗介质引入细胞外物理刺激以获得更高的效率，并引入更简单的脂肪细胞去分化程序。
[背景]脂肪组织由于其丰度大且侵袭性相对较低，因此是间充质干细胞（MSC）最具吸引力的来源之一（Shen等，2011 ；González-Cruz等，2012； Konno等人，2013）。脂肪来源的MSC，即从皮下脂肪组织的基质血管级分中分离，已被证实同时显示多谱系潜能的体外和体内（Anghileri等人，2008;冈萨雷斯。等人，2009;冈萨雷斯-雷伊等等人，2010； Jumabay等人，2010； Mao等人，2017和2019 ；Darnell等人，2018 ...
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| H1N1 Virus Production and Infection
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] Influenza A virus is a member of orthomyxoviridae family causing wide-spread infections in human respiratory tract. Mouse infection model is widely used in antiviral research and pathogenesis study against influenza A virus. Here, we report a protocol in infected mice with different virus doses and strains to explore how an inhibitor of lysine-specific demethylase (LSD1) impacts disease progression.
[摘要] 甲型流感病毒是正粘病毒科的成员，在人呼吸道中引起广泛的感染。 小鼠感染模型广泛用于抗甲型流感病毒的抗病毒研究和发病机制研究。 在这里，我们报告了受感染小鼠中具有不同病毒剂量和菌株的方案，以探索赖氨酸特异性去甲基化酶（LSD1）的抑制剂如何影响疾病进展。
【背景】甲型流感病毒是正粘病毒科的一员，是一种负义RNA病毒，具有八个分段的单链病毒RNA（vRNA）基因组，编码10种以上的蛋白质。在过去100年中，流感病毒株的爆发经常出现在人群中，包括1918年由H1N1亚型引起的“西班牙流感”，1957年由H2N2引起的“亚洲流感”，1968年由H3N2引起的“香港流感”， “H1N1流感”于1977年发生的“俄罗斯流感”，以及2009年H1N1流行的“猪流感”（Smith et al。>，2009; Lim and Mahmood，2011; Kumar et al。> ，2018年）。季节性甲型流感病毒也在世界范围内传播，容易在人与人之间传播，每年导致全世界300万至500万人住院（Molinari et al。>，2007）。季节性流感感染每年导致290,000-650,000人死亡，主要是年幼儿童，老年人和重症患者（Kumar et al。>，2018）。
流感病毒研究中使用动物模型不仅可以阐明影响疾病结果的病毒和宿主因素，还可以在易感宿主中传播，还可以评估旨在预防或降低流感发病率和死亡率的干预措施（Thangavel和Bouvier，2014）。在本文中，我们使用两种甲型流感病毒，A ...
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