| Self-organization Assay for Min Proteins of Escherichia coli in Micro-droplets Covered with Lipids
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] The Min system determines the cell division plane of bacteria. As a cue of spatiotemporal regulation, the Min system uses wave propagation of MinD protein (Min wave). Therefore, the reconstitution of the Min wave in cell-sized closed space will lead to the creation of artificial cells capable of cell division. The Min waves emerge via coupling between the reactions among MinD, MinE, and ATP and the differences in diffusion rate on the cell membrane and in the cytoplasm. Because Min waves appear only under the balanced condition of the reaction-diffusion coupling, special attentions are needed towards several technical points for the reconstitution of Min waves in artificial cells. This protocol describes a technical method for stably generating Min waves in artificial cells.
[摘要] [摘要 ] Min系统确定细菌的细胞分裂平面。作为时空调节的提示，Min系统使用MinD 蛋白的波传播（Min wave）。因此，Min波在细胞大小的封闭空间中的重构将导致能够分裂细胞的人造细胞的产生。闵波出现经由耦合之间反应小号中MinD的，的MinE ，和ATP 和所述differenc ES 在细胞膜上的扩散速度和在细胞质中。因为最小波仅在反应扩散耦合的平衡条件下出现， 特别关注，需要对几个技术要点为闽波在人造细胞重建。该协议描述了一种在人造细胞中稳定产生Min波的技术方法。
[背景 ] 敏系统，它决定了细胞分ER 对称细胞分裂，是在细菌细胞内的组织系统的最显着的例子之一（Rothfield 等人，2005;和罗利特马戈林，2013年）。敏系统使用图案形成在细胞内的时间依赖性蛋白梯度的公知的作为敏波（宽松等人，2008; Halatek和Frey，2012;邦尼等人，2013; Zieske 。等人，2016 ; Kohyama 。等人， 2019 ）。Min波是由两种蛋白MinD 和MinE 的反应扩散耦合产生的。通过与ATP结合，MinD 形成二聚体并附着在膜上。的MinE 被招募到的ATP MinD的和诱导ATP酶的活性MinD的。通过MinE ，ATP- MinD 变为ADP- MinD ，并从膜上脱离。ADP- MinD的被转换回ATP- ...
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| A Procedure for Precise Determination of Glutathione Produced by Saccharomyces cerevisiae
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] In bioproduction, yields of products must be calculated precisely for accurate evaluation of various fermentation conditions. To evaluate productivity of microorganisms, product amounts per unit of medium volume (e.g., mg-product/L-broth), and/or product amounts per unit of a microorganism amount (e.g., mg-product/mg-dry cell weight) are often used. Nonetheless, detailed procedures for calculation of these production yields are often omitted in research articles, whereas methods for product quantification are described well. Here, we describe a detailed calculation procedure from our previous studies on glutathione production by Saccharomyces cerevisiae. This procedure can be applied to various other products and microorganisms, and therefore, may prove to be ...
[摘要] 在生物生产中，必须精确计算产品的产量，以准确评估各种发酵条件。 为了评估微生物的生产力，每单位培养基体积的产物量（例如，mg-产物/ L-肉汤）和/或每单位微生物量的产物量（例如， ，毫克产品/毫克干细胞重量）经常使用。 尽管如此，在研究文章中常常忽略用于计算这些产量的详细程序，而产品量化的方法则被很好地描述。 在这里，我们描述了我们以前关于酿酒酵母产生谷胱甘肽的研究的详细计算过程。 该程序可以应用于各种其他产品和微生物，因此可能证明可用于各种其他生物生产研究。
【背景】谷胱甘肽是所有生物体中含量最高的含巯基三肽，并且作为在细胞中具有不同作用的生物活性物质起作用，例如作为氧化还原和解毒剂。因此，谷胱甘肽如今被广泛用于医疗，食品和化妆品行业，并且近年来需求增加。谷胱甘肽在工业上主要通过使用原始含有高浓度谷胱甘肽的酿酒酵母进行发酵生产，并且已经作为安全的食品生产微生物。对各种微生物中的微生物谷胱甘肽产生的研究在未来将变得更加重要。为了评估各种微生物发酵产生谷胱甘肽的效率，我们在这里描述了我们详细的样品制备程序，高效色谱（HPLC）定量还原和氧化谷胱甘肽的方法，以及两种产量的计算方法（Hara ） 2012; Hara等人，2015; Kiriyama等人，2013; Kobayashi等人 2017年）。
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| Transplantation of Mesenchymal Cells Including the Blastema in Regenerating Zebrafish Fin
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Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] Regeneration of fish fins and urodele limbs occurs via formation of the blastema, which is a mass of mesenchymal cells formed at the amputated site and is essential for regeneration. The blastema transplantation, a novel technique developed in our previous studies (Shibata et al., 2016; Yoshinari et al., 2012) is a useful approach for tracking and manipulating the blastema cells during fish fin regeneration.
[摘要] 鱼鳍和尿le肢的再生通过形成大气泡，其是在截肢位点处形成的质量的间充质细胞并且对于再生是必需的。胚胎移植是我们以前研究（Shibata等人，2016; Yoshinari等人，2012）开发的一种新技术，是一种有用的方法，用于跟踪和操纵鱼翅再生期间的blastema细胞。
背景在诸如鱼，两栖动物和哺乳动物之类的动物模型的早期胚胎阶段常规进行细胞移植研究，但将移植细胞靶向特定组织是困难的。在我们的研究中开发的Blastema移植是将间充质供体细胞引入宿主翅片射线的有效方法。它使我们能够在鱼翅再生期间跟踪细胞命运和/或操纵细胞信号，如成纤维细胞生长因子（Fgf）。实际上，在我们最近出版的作品中，我们将携带hsp701：显性负性fgf受体和β-肌动蛋白：dsRed2转基因的blastema细胞移植到野生型类型blastema区域并且在鳍状线间充质细胞的子集（Shibata等人，2016）中马齿抑制Fgf信号传导。该方法适用于分析其他细胞信号和通过活细胞成像跟踪细胞命运。
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