| Isolation and Primary Culture of Adult Human Adipose-derived Stromal/Stem Cells
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Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Adipose-derived stromal/stem cells (ASCs) are multipotent cells that can be isolated from adipose tissue. Studies have shown that cells have the capacity to self-renew and differentiate into adipocyte, chondrocyte, myocyte, and osteoblast lineages. Thus, significant interest regarding their use for regenerative purposes to restore aging or damaged tissue has grown in recent decades. These cells have also been shown to immunomodulate the microenvironment and secrete abundant growth factors, which minimize inflammation and aid repair and regeneration. ASCs can be readily isolated from the stromal vascular fraction (SVF) of lipoaspirates. Given their ease of accessibility, bountiful source, and potential application in regenerative medicine and tissue engineering, there is growing interest ...
[摘要] 脂肪来源的基质/干细胞（ASCs）是可以从脂肪组织分离的多能细胞。研究表明，细胞具有自我更新和分化成脂肪细胞，软骨细胞，肌细胞和成骨细胞谱系的能力。因此，近几十年来，对再生用途恢复老化或损伤组织的兴趣越来越大。这些细胞也被证明可以免疫微环境并分泌丰富的生长因子，从而使炎症最小化并辅助修复和再生。 ASCs可以容易地从脂质体的基质血管分数（SVF）中分离出来。鉴于其易于获取，丰富的来源和在再生医学和组织工程中的潜在应用，对于ASC的表征和利用越来越感兴趣。该方案描述了从成人人类脂肪组织中分离的ASC以及用于培养维持的方法，包括扩增和低温保存。
背景 脂肪来源的基质/干细胞（ASCs）表现出干细胞领域的巨大潜力。根据造血干细胞移植的治疗奇迹，ASCs代表干细胞的未来，因为它们更容易获得源 - 脂肪组织。 ASCs自我更新和分化成各种组织谱系（包括脂肪细胞，软骨细胞，肌细胞和成骨细胞谱系）的能力允许恢复损伤的组织。另外，推测ASCs有可能在体外复制组织。器官将允许更容易获得新颖药物的评估，从而显着降低药物生产成本。然而，隔离，维护和冷冻保存过程中的不一致，禁止集体分析世界各地不同实验室的结果。用于分离和培养ASC的标准方案对于确保一致的数据分析是必要的。
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| Biochemical Analysis of Caspase-8-dependent Proteolysis of IRF3 in Virus-infected Cells
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Interferon regulatory factor 3 (IRF3) is a transcription factor, which is critical for the antiviral response against a wide range of viruses (Hiscott, 2007; Ikushima et al., 2013). It gets activated in virus-infected cells via Toll like receptors (TLRs), RIG-I (retinoic acid inducible gene 1) like receptors (RLRs), cyclic GMP-AMP synthase (cGAS) – stimulator of interferon genes (STING), which are sensors of viral components in the cells (Chattopadhyay and Sen, 2014a; 2014b; Hiscott, 2007). IRF3 is a cytoplasmic protein, upon activation by virally activated sensors it gets phosphorylated, translocated to the nucleus and binds to the interferon-sensitive response element (ISRE) of the gene promoters to induce their transcription (Hiscott, 2007). IRF3 has other functions, including ...
[摘要] 干扰素调节因子3（IRF3）是一种转录因子，对于广泛病毒的抗病毒反应至关重要（Hiscott，2007; Ikushima等，2013）。通过Toll样受体（TLR），RIG-I（视黄酸诱导型基因1）受体（RLR），环状GMP-AMP合成酶（cGAS） - 干扰素基因刺激剂（STING），其在病毒感染的细胞中被激活，其中是细胞中病毒组分的传感器（Chattopadhyay和Sen，2014a; 2014b; Hiscott，2007）。 IRF3是一种细胞质蛋白，当被病毒激活的传感器激活时，其被磷酸化，转移到细胞核并与基因启动子的干扰素敏感反应元件（ISRE）结合以诱导其转录（Hiscott，2007）。 IRF3具有其他功能，包括直接刺激病毒感染细胞凋亡。在该途径中，不需要IRF3的转录活性（Chattopadhyay等，2013b; Chattopadhyay等，2016; Chattopadhyay等，2010; Chattopadhyay和Sen，2010; Chattopadhyay等，2011）。这些途径受宿主因素以及病毒的负调控。我们的研究表明IRF3可以通过caspase-8依赖性切割进行蛋白水解加工（Sears等，2011）。 ...
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| Macrophage Inflammatory Assay
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Author:
Date:
2014-07-20
[Abstract] Macrophages represent a widely distributed and functionally diverse population of innate myeloid cells involved in inflammatory response to pathogens, tissue homeostasis and tissue repair (Murray and Wynn, 2011). Macrophages can be broadly grouped into two subpopulations with opposing activites: M1 or pro-inflammatory macrophages that promote T-helper type 1 (Th1) cell immunity and tissue damage, and M2 or anti-inflammatory/alternatively activated macrophages implicated in Th2 response and resolution of inflammation. Here we describe a rapid assay we used previously to monitor changes in pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokine production by lipopolysaccharide (LPS)-activated macrophages in response to therapeutic paracrine factors produced by adult stem cells (Bartosh et al. ...
[摘要] 巨噬细胞代表广泛分布的和功能不同的先天骨髓细胞群，参与对病原体的炎症反应，组织内稳态和组织修复（Murray和Wynn，2011）。巨噬细胞可以大致分为具有相反活性的两个亚群：M1或促炎性巨噬细胞，其促进T辅助1型（Th1）细胞免疫和组织损伤，以及M2或抗炎或交替激活的巨噬细胞涉及Th2反应和分辨率的炎症。在这里我们描述了一种快速测定，我们以前用于监测由脂多糖（LPS）激活的巨噬细胞在响应于由成体干细胞产生的治疗性旁分泌因子的促炎和抗炎细胞因子产生中的变化（Bartosh等，/em>，2010; Ylostalo等人，2012; Bartosh 等人，2013）。该测定可以适当地适应于测试巨噬细胞对其它试剂的响应，在本文中将称为"测试试剂"或"测试化合物"。在该方案中，小鼠巨噬细胞细胞系J774A.1被扩增作为陪替氏培养皿上的粘附单层，允许容易地收获细胞而没有可以损伤细胞的酶或细胞刮擦器。然后用LPS悬浮刺激大孔，并接种到含有试验试剂的12孔细胞培养板中。 16-18小时后，收集由巨噬细胞调节的培养基，并用酶联免疫吸附测定（ELISA）测定培养基中的细胞因子谱。我们常规测量促炎细胞因子TNF-α和抗炎细胞因子白细胞介素-10（IL-10）的水平。
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