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PierceTM BCA Protein Assay Kit

Pierce TM BCA蛋白测定试剂盒

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: 23225
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Phagocytosis Assay for α-Synuclein Fibril Uptake by Mouse Primary Microglia
Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract]  Microglia are professional phagocytes in the brain and deficiency in their phagocytic activity plays an important role in Parkinson’s disease. This protocol mainly describes the phagocytosis assay for uptake of α-synuclein preformed fibrils, a pathologic form of α-synuclein, by primary microglia. [摘要]  小胶质细胞是大脑中的专业吞噬细胞,其吞噬活性的缺乏在帕金森病中起重要作用。 该方案主要描述了通过原代小胶质细胞摄取α-突触核蛋白预先形成的原纤维(α-突触核蛋白的病理形式)的吞噬作用测定。

【背景】作为大脑的免疫细胞,小胶质细胞在中枢神经系统中起着关键作用。在生理状态下,小胶质细胞不断探索周围环境并参与突触修剪。小胶质细胞可被任何类型的病理事件或脑内稳态的变化激活(Wolf et al。,2017)。激活后,小胶质细胞经历形态学变化,增殖,分泌炎性细胞因子,迁移至病变部位,吞噬病原体,病细胞,碎片,甚至细胞外蛋白质聚集体(Kettenmann et al。,2011; Fu et al。,2014)。 α-突触核蛋白是神经元中的丰富蛋白质,并且是帕金森病中称为路易体和路易神经突的神经元内包涵体的主要成分(Luk 等人,,2012)。最近的研究表明α-突触核蛋白经历细胞间扩散,小胶质细胞是α-突触核蛋白的主要清除剂,它可能承担来自神经元的α-突触核蛋白的负担(Wolf et al。,2017 )。在这里,我们描述了使用人α-突触核蛋白单体产生预先形成的原纤维并通过小胶质细胞吞噬作用测量α-突触核蛋白预先形成的原纤维的摄取的方案(Du et al。,2017)。

Analysis of Metals in Whole Cells, Thylakoids and Photosynthetic Protein Complexes in Synechocystis sp. PCC6803
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  Metals are essential in many biological processes, including oxygenic photosynthesis. Here we described a method to measure the metal pool in whole cells and thylakoids, including the bioactive pool in intact photosynthetic protein complexes in the model oxygenic cyanobacterium Synechocystis PCC6803. In the first part of the protocol, whole cells and thylakoid membranes are carefully prepared, in which the total metal concentrations are measured by inductively coupled plasma triple-quadrupole mass spectrometry (ICP-QQQ-MS). In the second part of the protocol, isolated thylakoids are solubilized to release the integral membrane proteins and the metal binding protein complexes. These intact photosynthetic protein complexes are subjected to size exclusion chromatography (SEC) and ... [摘要]  金属在许多生物过程中是必不可少的,包括含氧光合作用。 在这里我们描述了测量全细胞和类囊体中金属库的方法,包括模型含氧蓝藻PCH6803中完整光合蛋白复合体中的生物活性库。 在方案的第一部分中,仔细制备全细胞和类囊体膜,其中通过电感耦合等离子体三重四极杆质谱(ICP-MS / MS)测量总金属浓度。 在该方案的第二部分,分离的类囊体被溶解以释放完整的膜蛋白和金属结合蛋白复合物。 将这些完整的光合蛋白复合物进行尺寸排阻色谱(SEC),并通过ICP-MS / MS进行连接分析尺寸分离的复合物中的金属结合。

【背景】氧光合作用的过程需要金属,因为它们在光合电子传递链中作为辅因子和催化剂的基本功能。光合装置需要Fe-S簇,血红素桥Fe和非血红素Fe形式的铁(Fe),可溶性移动电子载体蛋白质质体蓝素中的铜(Cu),叶绿素中的镁(Mg), ...

In vitro Analysis of Ubiquitin-like Protein Modification in Archaea
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  The ubiquitin-like (Ubl) protein is widely distributed in Archaea and involved in many cellular pathways. A well-established method to reconstitute archaeal Ubl protein conjugation in vitro is important to better understand the process of archaeal Ubl protein modification. This protocol describes the in vitro reconstitution of Ubl protein modification and following analysis of this modification in Haloferax volcanii, a halophilic archaeon serving as the model organism. [摘要]  泛素样(Ubl)蛋白广泛分布于古细菌中并参与许多细胞途径。 为了更好地理解古细菌Ub1蛋白质修饰的过程,重建体外古细菌Ubl蛋白质缀合物的完善方法是很重要的。 该协议描述了Ubl蛋白质修饰的体外重建以及在作为模型生物的嗜盐古细菌Haloferax volcanii 中对这种修饰进行分析。

【背景】泛素(Ub)与靶蛋白共价连接的过程被称为泛素化,其控制真核细胞中大量的细胞过程(Glickman和Ciechanover,2002; Komander和Rape,2012)。遍在蛋白化由一系列酶(包括Ub激活酶(E1),Ub结合酶(E2s)和Ub连接酶(E3s))催化。泛素化的体外重建是确定酶之间或E3与蛋白质底物之间特异性的有用测定法(Zhao等人,2012)。在古细菌中,Ubl蛋白SAMP采用Ub折叠,并且与E1样酶UbaA催化的蛋白靶标异肽连接[Maupin-Furlow,(2014)综述]。尽管E1同系物在古细菌中广泛存在,但基于一级序列比较,在大多数古细菌中未预测经典E2或E3酶。我们最近对Haloferax volcanii的研究表明甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)是Ubl蛋白质修饰(sampylation)与UbaA一起在体内温和的氧化条件下和< (体外)(fu="">

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