| Pollen Germination and Pollen Tube Growth of Arabidopsis thaliana: In vitro and Semi in vivo Methods
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Studies of pollen germination and post-germination development are not only essential for understanding plant reproduction but also are an excellent model system for tip-based growth. Here we describe easy, reproducible methods for germination and growth of pollen from the model plant Arabidopsis thaliana in artificial conditions. Our growth system can be used both for pollen placed directly on this artificial substrate as well as for the so-called ‘semi in vivo’ method. This is where a pistil is cut shortly after hand-pollination and the pollen tubes grow through the plant tissue and emerge from the cut end onto the surface of the artificial medium.
[摘要] 花粉萌发和萌发后发育的研究不仅对于理解植物繁殖是必不可少的，而且也是用于尖端生长的优秀模型系统。 在这里，我们描述了简单，可重复的方法，用于在人工条件下从模式植物拟南芥中萌发和生长花粉。 我们的生长系统既可用于直接置于该人工基质上的花粉，也可用于所谓的“半体内”方法。 这是在手动授粉后不久切割雌蕊并且花粉管通过植物组织生长并从切割末端出现在人工培养基表面上的地方。
【背景】 开花植物的花粉被广泛用作快速，尖端生长的模型系统。当然，花粉生物学的研究对于了解植物的生育力和生殖发育也是必不可少的。然而，一种简单可靠的方法是从模式植物拟南芥中萌发花粉并在体外维持快速，形态正常的花粉管生长令人沮丧地难以捉摸。在开发我们自己的方法（Rodriguez-Enriquez et al。，2013）之前，我们尝试复制几种已发表的方法，但经过多次尝试后，我们未能产生令人满意的结果。例如，在实验室中复制Boavida和McCormick的方法很困难，因为它具有非常窄的温度最佳值（22°C），这种情况显然不能反映 A的生殖生物学。拟南芥（Boavida和McCormick，2007）。此外，在该方法中存在发芽率和局部花粉密度的问题，其也不完全反映在柱头表面上的自然事件。我们的第一个线索是，体外可靠的花粉萌发所需的关键“缺失因子”来自观察到放置 ...
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| Studying the Role of Microglia in Neurodegeneration and Axonal Regeneration in the Murine Visual System
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Microglia reside in the central nervous system (CNS) and are involved in the maintenance of the physiologic state. They constantly survey their environment for pathologic alterations associated with injury or diseases. For decades, researchers have investigated the role of microglia under different pathologic conditions, using approaches aiming to inhibit or eliminate these phagocytic cells. However, until recently, methods have failed to achieve complete depletion. Moreover, treatments often affected other cells, making unequivocal conclusions from these studies difficult. Recently, we have shown that inhibition of colony stimulating factor 1 receptor (CSF1R) by oral treatment with PLX5622 containing chow enables complete depletion of retinal microglia and almost complete microglia ...
[摘要] 小胶质细胞存在于中枢神经系统（CNS）中，并参与维持生理状态。他们不断调查他们的环境，以寻找与受伤或疾病相关的病理改变。几十年来，研究人员使用旨在抑制或消除这些吞噬细胞的方法，研究了小胶质细胞在不同病理条件下的作用。然而，直到最近，方法未能实现完全耗尽。此外，治疗通常会影响其他细胞，因此难以从这些研究中得出明确的结论。最近，我们已经表明，通过用含有食物的PLX5622口服治疗抑制集落刺激因子1受体（CSF1R）能够完全消除视网膜小胶质细胞并且几乎完全消除视神经中的小胶质细胞，而不影响外周巨噬细胞或其他细胞。使用这种方法，我们研究了小胶质细胞在视网膜神经保护中的作用以及在不同条件下受损视神经中的轴突再生。因此，这里提出的这种有效，可靠和易于使用的方案将使研究人员能够明确地研究小胶质细胞对神经变性和轴突再生的贡献。该方案还可以容易地扩展到视觉系统中的急性和慢性损伤或疾病的其他范例。
【背景】 小胶质细胞是中枢神经系统（CNS）的常驻免疫细胞，其持续扫描其环境以进行病理改变（Nimmerjahn et al。，2005）。在检测到这种情况后，小胶质细胞转变为活化状态并向其进行不同任务的来源迁移（Kreutzberg，1996; Davalos et ...
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| In situ Hybridization (ISH) in Preparasitic and Parasitic Stages of the Plant-parasitic Nematode Meloidogyne spp.
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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] The spatio-temporal expression pattern of a gene provides important indications to better understand its biological function. In situ hybridization (ISH) uses a labeled complementary single-stranded RNA or DNA probe to localize gene transcripts in a whole organism, a whole organ or a section of tissue. We adapted the ISH technique to the plant parasite Meloidogyne spp. (root-knot nematode) to visualize RNAs both in free-living preparasitic juveniles and in parasitic stages settled in the plant tissues. We describe each step of the probe synthesis, digoxigenin (DIG) labeling, nematode extraction from plant tissue, and ISH procedure.
[摘要] 基因的时空表达模式为更好地理解其生物学功能提供了重要的指示。 原位杂交（ISH）使用标记的互补单链RNA或DNA探针来定位整个生物体，整个器官或一部分组织中的基因转录物。 我们将ISH技术应用于植物寄生虫
【背景】到目前为止，植物寄生性线虫的稳定转化尚未成功。 ISH能够在整个装载的Meloidogyne spp中分析体内时空基因表达。线虫。这些根结线虫在土壤中以微小蚓状幼虫（J2）形式孵化并感染宿主植物根部。 J2s穿透根部并迁移到根部维管柱状细胞。幼虫定居在根部，发育成J3和J4寄生幼鱼，诱导分化专化饲养细胞。线虫最终发育成梨形雌性，将在根表面释放数百个卵。在这里，我们报告了一个详细的协议来检测准备性整体安装J2s和寄生阶段中的单个RNA分子。寄生虫阶段的ISH需要在感染根部提取线虫前一天采取额外的程序。我们描述了在线虫整个组织中使用地高辛（DIG）标记的cDNA探针检测转录物。
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