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Tryptone

胰蛋白胨

Company: BD
Catalog#: 211705
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Company-protocol()
Other protocol()

Quantification of Bacterial Twitching Motility in Dense Colonies Using Transmitted Light Microscopy and Computational Image Analysis
Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract]  A method was developed to allow the quantification and mapping of relative bacterial twitching motility in dense samples, where tracking of individual bacteria was not feasible. In this approach, movies of bacterial films were acquired using differential interference contrast microscopy (DIC), and bacterial motility was then indirectly quantified by the degree to which the bacteria modulated the intensity of light in the field-of-view over time. This allowed the mapping of areas of relatively high and low motility within a single field-of-view, and comparison of the total distribution of motility between samples. [摘要]  开发了一种方法,可以对密集样本中的相对细菌抽动动力进行定量和绘图,在这些样本中追踪单个细菌是不可行的。 在这种方法中,使用微分干涉对比显微镜(DIC)获得细菌膜的电影,然后通过细菌随时间调节视场中的光强度的程度间接量化细菌运动。 这允许在单个视场内绘制相对较高和较低运动性的区域,并比较样本之间运动的总分布。

【背景】Pilus介导的颤动运动表示与鞭毛无关的与表面相关的细菌运动形式。抽动动力被很多细菌病原体利用,包括淋病奈瑟氏球菌和铜绿假单胞菌与潮湿的表面相互作用并移位上皮屏障。在 P。颤动动力受大量基因调控,这些基因允许IV型菌毛的延伸和回缩,以有效地将细菌细胞拖过任何给定的表面以响应环境提示(Mattick,2002; Whitchurch et al。,2004; Burrows,2005)。在我们对 P的研究中。绿脓杆菌发病机制,抽动运动性有助于细菌在内化和多层角膜上皮细菌穿过后从上皮细胞排出(Alarcon等人,2009)。在角膜感染的小鼠模型中,抽动运动对于P是重要的。绿脓杆菌毒力(Zolfaghar et al。,2003)。最近,我们发现在粘膜液体如人眼泪和唾液中发现的糖蛋白DMBT1能够抑制P细胞。绿脓杆菌抽动动力(Li等人,2017)。在那项研究中,我们利用了一种新方法来快速和可靠地量化P.绿脓杆菌抽动动力。该协议在此处介绍。
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Method for CRISPR/Cas9 Mutagenesis in Candida albicans
Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract]  Candida albicans is the most prevalent and important human fungal pathogen. The advent of CRISPR as a means of gene editing has greatly facilitated genetic analysis in C. albicans. Here, we describe a detailed step-by-step procedure to construct and analyze C. albicans deletion mutants. This protocol uses plasmids that allow simple ligation of synthetic duplex 23mer guide oligodeoxynucleotides for high copy gRNA expression in C. albicans strains that express codon-optimized Cas9. This protocol allows isolation and characterization of deletion strains within nine days. [摘要]  白色念珠菌是最普遍和最重要的人类真菌病原体。 CRISPR作为基因编辑手段的出现极大地促进了 C中的遗传分析。白色假丝酵母。 在这里,我们描述一个详细的分步过程来构建和分析 C。 白色念珠菌缺失突变体。 该协议使用质粒,允许合成的双链体23mer引导寡聚脱氧核苷酸在高拷贝gRNA表达的简单连接。 表达密码子优化的Cas9的白色念珠菌菌株。 该协议允许在9天内分离和鉴定缺失菌株。

【背景】℃。白色念珠菌是一种难以处理遗传的有机体。由于它通常作为不容易进行有性生殖的二倍体存在,所以纯合隐性突变需要对每个基因座进行连续修饰。克隆间规则间隔短回文重复(CRISPR)突变的发展和应用。白色念珠菌促进遗传操作,因为它允许两个等位基因同时突变(Vyas et al。,2015; Min et al。,2016; Ng and Dean,2017 )。 CRISPR基因编辑涉及将RNA引导的核酸酶募集至邻近NGG原型间隔子邻接基序(PAM)的互补靶位点(Jinek等人,2012; Cong等人, 2013年;马里等人,2013年)。 CRISPR相关(Cas)核酸酶通过与结合Cas9的激活CRISPR RNA(tracrRNA)相关的指导RNA之间的互补碱基配对以高特异性进行靶向(Gasiunas等人, ...

Measurement of ROS in Caenorhabditis elegans Using a Reduced Form of Fluorescein
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract]  Oxidative stress is implicated in the pathogenesis of various neurodegenerative diseases, including Alzheimer’s disease. Oxidative stress is a result of a disruption of the equilibrium between antioxidants and oxidants, in favor of oxidants. Since mitochondria are major sites of production and reduction of reactive oxygen species (ROS), measurement of ROS levels can help us determine if mitochondrial functional integrity has been compromised. In this protocol, we describe a method to measure the level of ROS in the nematode Caenorhabditis elegans, using chloromethyl-2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate (CM-H2DCFDA). [摘要]  氧化应激涉及各种神经退行性疾病的发病机制,包括阿尔茨海默病。 氧化应激是抗氧化剂和氧化剂之间平衡中断的结果,有利于氧化剂。 由于线粒体是主要的产生和活性氧(ROS)减少的部位,ROS水平的测量可帮助我们确定线粒体功能完整性是否受到损害。 在该协议中,我们描述了使用氯甲基-2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(CM-H 2),测量线虫秀丽隐杆线虫中ROS的水平的方法,DCFDA)。

【背景】ROS的生命周期与线粒体密切相关。超氧化物是由于线粒体中电子传递链的复合物I和复合物III不可避免地发生电子泄漏而产生的。这种超氧化物然后在线粒体基质和线粒体膜间隙中被过氧化氢歧化。通过这些过程产生的超氧化物和过氧化氢被认为是ROS,其中线粒体负责90%的内源性ROS(Balaban等人,2005)。因此,测量ROS水平将提供对线粒体健康状况的了解。在这里,我们提供了一个协议来确定线虫中的ROS水平。使用CM-H 2 DCFDA(一种还原形式的荧光素的渗透细胞氯甲基衍生物)的线虫。一旦进入细胞内,CM-H 2 DCFDA被细胞内酯酶切割,并且由ROS产生的氧化产生的非荧光H 2 DCF被转化为高度荧光的2 ',7'-二氯荧光素(DCF)。活体C中H 2 DCFDA的荧光强度的成像和测量。 elegans ...

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