| Immunofluorescence Analysis of Human Endocervical Tissue Explants Infected with Neisseria gonorrhoeae
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Colonization and penetration of the epithelium is the infection-initiating route of mucosal pathogens. The epithelium counteracts infection by eliciting host cell responses while maintaining the mucosal barrier function. The obligate human sexually transmitted bacterium Neisseria gonorrhoeae, or gonococcus (GC) infects the female reproductive tract primarily from the endocervical epithelium. Due to lack of an infection model that mimics all aspects of human infections in the female reproductive tract, GC pathogenesis is poorly understood. This protocol takes advantage of the viability and functional integrity of human cervical tissues propagated in culture to generate an ex vivo infection model. This tissue model maintains the nature of the infection target and ...
[摘要] 上皮的定植和穿透是粘膜病原体的感染启动途径。 上皮细胞通过引发宿主细胞应答来抵抗感染，同时维持粘膜屏障功能。 专性人类性传播细菌淋病奈瑟氏球菌或淋球菌属（GC）主要从宫颈内膜上皮感染女性生殖道。 由于缺乏模仿女性生殖道人类感染的各个方面的感染模型，GC发病机制知之甚少。 该方案利用培养物中繁殖的人宫颈组织的生存力和功能完整性来产生体外感染模型。 这种组织模型保持了感染目标和环境的性质，而没有任何操作，如病毒永生化上皮细胞。 使用免疫荧光显微镜，分析GC与子宫颈上皮细胞的相互作用。
【背景】淋病奈瑟菌（GC）感染人类生殖器上皮，引起淋病，一种常见的性传播感染。女性感染可导致严重的并发症，如盆腔炎，引起输卵管瘢痕和堵塞，易发生异位妊娠或不孕。由于抗生素耐药菌株的流行率增加，淋病又成为重要的公共卫生问题。由于人类是GC的唯一宿主，因此缺乏模仿人类感染各个方面的感染模型是推进我们对GC发病机理的理解的主要障碍。我们建立了人宫颈组织外植体模型和免疫荧光显微镜分析来检测GC感染妇女GC感染的主要部位人间宫颈细胞的机制。这种体外模型保持了宫颈上皮细胞的正常细胞构筑和组织完整性。使用这种模型和免疫荧光分析，我们表明，气相色氨酸定居和渗透到子宫颈组织，在那里他们可能导致症状和播散性淋球菌感染。 ...
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| GC/MS-based Analysis of Volatile Metabolic Profile Along in vitro Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) are a promising tool in cell-based therapies for degenerative diseases. A safe application of hiPSCs in vivo, requires the detection of the presence of residual undifferentiated pluripotent cells that can potentially cause the insurgence of teratomas. Several studies point out that metabolic products may provide an alternative method to identify the different steps of cells differentiation. In particular, the analysis of volatile organic compounds (VOCs) is gaining a growing interest in this context, thanks to its inherent noninvasiveness. Here, a protocol for VOCs analysis from human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) is illustrated. It is based on Solid-Phase Microextraction (SPME) technique coupled with gas chromatography-mass ...
[摘要] 人诱导的多能干细胞（hiPSC）是用于退化性疾病的基于细胞的疗法中的有前景的工具。 hiPSCs在体内的安全应用需要检测残留未分化多能细胞的存在，这可能会导致畸胎瘤的爆发。几项研究指出，代谢产物可能提供了另一种方法来确定细胞分化的不同步骤。特别是挥发性有机化合物（VOCs）的分析由于其固有的非侵入性而在这方面越来越受到关注。在这里，说明了从人诱导的多能干细胞（hiPSC）分析VOC的方案。它基于固相微萃取（SPME）技术与气相色谱 - 质谱联用（GC / MS）。该方法用于测量从绒毛膜样品（CVS）到hiPSC的细胞重编程期间和沿着hiPSC体外分化成早期神经祖细胞（NP）的细胞顶空中的挥发性代谢物修饰，穿过胚状体机构（EBs）的形成。
【背景】提出细胞代谢作为在分化的各个步骤期间研究干细胞的替代物。事实上，假设干细胞从多能性向完全分化的转变可能引起代谢产物的剧烈变化是合理的。在诱导的多能干细胞，亲本成纤维细胞和胚胎干细胞之间观察到了这种假设的第一个证据（Meissen等人，2012）。
在代谢产物中，挥发性有机化合物（VOC）吸引了人们对其收集的简单性，内在的非侵入性和广泛的分析方法的广泛关注（Boots et。，2015 ...
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| Isolation of Primary Human Skeletal Muscle Cells
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] Primary myoblast culture is a valuable tool in research of muscle disease, pathophysiology, and pharmacology. This protocol describes techniques for dissociation of cells from human skeletal muscle biopsies and enrichment for a highly myogenic population by fluorescence-activated cell sorting (FACS). We also describe methods for assessing myogenicity and population expansion for subsequent in vitro study.
[摘要] 原代成肌细胞培养是研究肌肉疾病，病理生理学和药理学的有用工具。 该协议描述了通过荧光激活细胞分选（FACS）从人类骨骼肌活检中分离细胞并富集高度肌原细胞的技术。 我们还描述了用于评估随后的体外研究中肌原性和群体扩张的方法。
【背景】来自肌肉活组织检查的原代人成肌细胞是模拟体外人体肌肉疾病的有价值的资源。成肌细胞增殖，分化和融合的改变是许多神经肌肉疾病所共有的特征，并且可以用于测定基于细胞的和药理学的治疗。人类骨骼肌活组织检查，尤其是那些受疾病影响的人，通常含有大量的非肌原细胞，如脂肪细胞和成纤维细胞。因此，纯化肌原细胞进行骨骼肌发育和疾病的体外研究是非常重要的。肌肉疾病的早期研究涉及使用组织外植体或未纯化的分离细胞（Geiger和Garvin，1957; Herrmann等人，1960; Goyle等人，1967; Bishop 1971年），后来，Blau和Webster引入了一种预先电镀技术去除成纤维细胞（Blau and ...
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