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Imidazole

咪唑

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: I5513
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Laminarin Quantification in Microalgae with Enzymes from Marine Microbes
Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract]  The marine beta-glucan laminarin is an abundant storage polysaccharide in microalgae. High production rates and rapid digestion by heterotrophic bacteria turn laminarin into an ideal carbon and energy source, and it is therefore a key player in the marine carbon cycle. As a main storage glucan laminarin also plays a central role in the energy metabolism of the microalgae (Percival and Ross, 1951; Myklestad, 1974; Painter, 1983). We take advantage of enzymes that digest laminarin selectively and can thereby quantify only this polysaccharide in environmental samples. These enzymes hydrolyze laminarin into glucose and oligosaccharides, which are measured with a standard reducing sugar assay to obtain the laminarin concentration. Prior to this assay, the three enzymes need to be produced via ... [摘要]  海洋β-葡聚糖昆布多糖是微藻中丰富的储存多糖。高生产率和异养细菌的快速消化将昆布多糖转化为理想的碳源和能源,因此它是海洋碳循环的关键参与者。作为主要的储存葡聚糖昆布多糖也在微藻的能量代谢中发挥核心作用(Percival and Ross,1951; Myklestad,1974; Painter,1983)。我们利用可以选择性消化昆布多糖的酶,从而可以对环境样品中的这种多糖进行定量。这些酶将昆布多糖水解成葡萄糖和寡糖,用标准的还原糖测定法测定得到昆布多糖浓度。在此测定之前,需要通过异源表达和纯化产生三种酶。该测定可用于监测环境微藻中的昆布多糖浓度,其通过过滤从海水中浓缩,或用来自藻类实验室培养物的样品中浓缩。

【背景】海洋多糖在海洋碳循环中起着重要作用,是浮游植物生理学的重要组成部分,但受到严重影响。几十年来,农业食品工业一直使用基于酶分析的即用试剂盒来分析各种不同的多糖(Whitaker,1974)。这些快速,稳健和特异性的基于酶的方法评估源自陆地植物即淀粉的多糖,因为它们广泛用于食品,饲料和其他工业应用中(Brunt等人, ,1998)。然而,海洋多糖的类似测定仍然缺乏。受到使用酶在藻类中进行多糖定量的想法的启发,我们开发了一种基于酶的方法来量化在硅藻和其他微藻中生态相关的β-葡聚糖昆布氨酸,也称为菊科金刚烷。

这种应用的三种糖苷水解酶(GH)来自福尔摩沙(Formosa)。并且它们的特征如下:FbGH30是GH30家族的外切型β-1,6-葡聚糖酶,特别是水解与昆布多糖骨架连接的β-1,6-连接的葡萄糖单体分支;并且FaGH17A和FbGH17A是GH家族17的两种内作用β-1,3-葡聚糖酶,其特异性地作用于β-1,3-连接的昆布多糖主链上(Becker等人,2017年, ...

Fluorophore Labeling, Nanodisc Reconstitution and Single-molecule Observation of a G Protein-coupled Receptor
Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract]  Activation of G protein-coupled receptors (GPCRs) by agonist ligands is mediated by a transition from an inactive to active receptor conformation. We describe a novel single-molecule assay that monitors activation-linked conformational transitions in individual GPCR molecules in real-time. The receptor is site-specifically labeled with a Cy3 fluorescence probe at the end of trans-membrane helix 6 and reconstituted in phospholipid nanodiscs tethered to a microscope slide. Individual receptor molecules are then monitored over time by single-molecule total internal reflection fluorescence microscopy, revealing spontaneous transitions between inactive and active-like conformations. The assay provides information on the equilibrium distribution of inactive and active receptor conformations and ... [摘要]  通过激动剂配体激活G蛋白偶联受体(GPCR)是通过从无活性受体构象向活性受体构象的转变来介导的。我们描述了一种新颖的单分子测定法,可以实时监测单个GPCR分子中的激活连锁构象转换。受体在跨膜螺旋6末端用Cy3荧光探针进行位点特异性标记,并在连接到显微镜载玻片的磷脂纳米圆盘中重构。然后通过单分子全内反射荧光显微镜随时间监测单个受体分子,显示无活性和活性样构象之间的自发转变。该测定提供关于无活性和活性受体构象的平衡分布以及构象交换的速率常数的信息。实验可以在不存在配体的情况下进行,显示负责基础信号传导活动的自发构象过渡,或者存在激动剂或反向激动剂配体,揭示配体如何改变受体的动力学刺激或抑制信号传导活性。所得到的机械信息对于改进的GPCR靶向药物的设计是有用的。单分子测定法在β2肾上腺素能受体的背景下进行了描述,但可扩展到多种GPCRs。
【背景】GPCR介导本地和远距离的细胞通讯,特别是内分泌系统。例如,细胞对激素如肾上腺素的反应是通过肾上腺素能受体介导的,其中β2肾上腺素能受体(β2AR)是突出的成员。 ...

Measurement of RNA-induced PKR Activation in vitro
Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract]  Protein kinase R (PKR) is one of the key RNA-activated sensors for innate immunity. PKR is activated by pathogenic or aberrant RNAs such as short double-stranded RNAs or those with imperfect secondary structures, as well as a reduction in the amount and number of RNA modifications. Activation of PKR may be an underlying mechanism for the pathogenesis of human diseases. In this protocol, I describe a method for studying levels of RNA-induced PKR activation in vitro. [摘要]  蛋白激酶R(PKR)是先天免疫的核心RNA激活传感器之一。 PKR由致病性或异常RNA如短双链RNA或具有不完全二级结构的RNA激活,以及RNA修饰的量和数量的减少。 PKR的激活可能是人类疾病发病机制的潜在机制。在本协议中,我描述了一种在体外研究RNA诱导的PKR激活水平的方法。

背景 PKR是四种哺乳动物激酶之一,其响应于应激信号磷酸化真核起始因子2-α亚基(eIF2α)。 PKR主要是响应于病毒感染而激活(Holcik和Sonenberg,2005)。 PKR是识别和结合病原RNA的先天免疫的关键组成部分。 RNA与PKR的相互作用促进并稳定其二聚化。然后PKR经历自身磷酸化,随后磷酸化eIF2α以切断一般翻译,同时激活下游信号级联,包括增加的ATF4应激反应转录因子的翻译(Hinnebusch,2005)。
 已知PKR被短双链RNA激活(Manche等人,1992; Zheng和Bevilacqua,2004)以及具有一些不完全二级结构的RNA,例如发夹环(Bevilacqua 等人,1998)。此外,RNA生物发生缺陷,包括较低水平的m ...

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