| H1N1 Virus Production and Infection
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] Influenza A virus is a member of orthomyxoviridae family causing wide-spread infections in human respiratory tract. Mouse infection model is widely used in antiviral research and pathogenesis study against influenza A virus. Here, we report a protocol in infected mice with different virus doses and strains to explore how an inhibitor of lysine-specific demethylase (LSD1) impacts disease progression.
[摘要] 甲型流感病毒是正粘病毒科的成员，在人呼吸道中引起广泛的感染。 小鼠感染模型广泛用于抗甲型流感病毒的抗病毒研究和发病机制研究。 在这里，我们报告了受感染小鼠中具有不同病毒剂量和菌株的方案，以探索赖氨酸特异性去甲基化酶（LSD1）的抑制剂如何影响疾病进展。
【背景】甲型流感病毒是正粘病毒科的一员，是一种负义RNA病毒，具有八个分段的单链病毒RNA（vRNA）基因组，编码10种以上的蛋白质。在过去100年中，流感病毒株的爆发经常出现在人群中，包括1918年由H1N1亚型引起的“西班牙流感”，1957年由H2N2引起的“亚洲流感”，1968年由H3N2引起的“香港流感”， “H1N1流感”于1977年发生的“俄罗斯流感”，以及2009年H1N1流行的“猪流感”（Smith et al。>，2009; Lim and Mahmood，2011; Kumar et al。> ，2018年）。季节性甲型流感病毒也在世界范围内传播，容易在人与人之间传播，每年导致全世界300万至500万人住院（Molinari et al。>，2007）。季节性流感感染每年导致290,000-650,000人死亡，主要是年幼儿童，老年人和重症患者（Kumar et al。>，2018）。
流感病毒研究中使用动物模型不仅可以阐明影响疾病结果的病毒和宿主因素，还可以在易感宿主中传播，还可以评估旨在预防或降低流感发病率和死亡率的干预措施（Thangavel和Bouvier，2014）。在本文中，我们使用两种甲型流感病毒，A ...
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| Investigating Localization of Chimeric Transporter Proteins within Chloroplasts of Arabidopsis thaliana
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] In this protocol, we describe a method to design chimeric proteins for specific targeting to the inner envelope membrane (IEM) of Arabidopsis chloroplasts and the confirmation of their localization by biochemical analysis. Specific targeting to the chloroplast IEM can be achieved by fusing the protein of interest with a transit peptide and an IEM targeting signal. This protocol makes it possible to investigate the localization of chimeric proteins in chloroplasts using a small number of transgenic plants by using a modified method of chloroplast isolation and fractionation. IEM localization of chimeric proteins can be further assessed by trypsin digestion and alkaline extraction. Here, the localization of the chimeric bicarbonate transporter, designated as SbtAII, is detected by ...
[摘要] 在这个协议中，我们描述了一种设计嵌合蛋白的方法，用于特异性靶向拟南芥叶绿体的内包膜（IEM）并通过生化分析确定它们的定位。 叶绿体IEM的特异性靶向可通过将感兴趣的蛋白质与转运肽和IEM靶向信号融合来实现。 这个协议使得有可能使用少量的转基因植物，通过使用修改的叶绿体分离和分离方法来研究嵌合蛋白在叶绿体中的定位。 嵌合蛋白的IEM定位可以通过胰蛋白酶消化和碱性提取进一步评估。 在此，称为SbtAII的嵌合碳酸氢根转运蛋白的定位通过使用针对葡萄球菌蛋白A的抗体进行蛋白质印迹来检测。该方案改编自上原等人，2016年
【背景】有人提出将蓝藻CO 2浓度机制整合到叶绿体中是改善C 3+植物光合作用的有希望的方法。 根据理论估计，将BicA和SbtA整合到叶绿体IEM中可以提高光合CO 2固定率。 我们研究了核编码的蓝细菌碳酸氢盐转运蛋白BicA和SbtA与拟南芥叶绿体的IEM的整合。 因此，我们制定了一个协议，设计嵌合构造为特定目标的IEM和调查嵌合蛋白在叶绿体中的定位。
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| Lung Section Staining and Microscopy
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Our protocol describes immunofluorescent staining, hematoxylin and eosin staining and Masson’s trichrome staining on lung sections.
[摘要] 我们的方案描述了免疫荧光染色，苏木精和伊红染色以及Masson在肺切片上的三色染色。
背景 肺的主要功能是气体交换。肺由各种专门的细胞和组织组成，包括支气管，细支气管和肺泡，以促进气体交换。为了研究小鼠模型中的肺发育或肺部疾病，可以从小鼠中去除肺，并将其冷冻并嵌入最佳切割温度（OCT）化合物或化学保藏并包埋在石蜡中。为了保持肺组织结构，我们用1ml OCT化合物填充肺，用于制备冷冻切片，或用于石蜡切片的10％缓冲福尔马林（Zhou等人，2016）。然后将肺切片从冷冻或石蜡包埋的肺切片并安装到载玻片上用于制备染色。我们使用冷冻组织切片进行基于抗体的免疫荧光染色，并使用石蜡包埋切片进行苏木精和伊红（H＆E）染色或Masson三色染色。冷冻切片更快地准备免疫荧光染色，大多数抗体在冷冻切片上工作良好。石蜡切片也可用于免疫荧光染色，但需要脱蜡，补液和抗原检索。即使在抗原检索后，一些抗体在石蜡切片上也不能很好地工作。然而，石蜡样品可以在室温下储存很长时间，并且可以容易地切成非常薄的部分。石蜡切片保留比冷冻切片更好的组织形态，因此它们对于H＆E或三色染色更好。
＆NBSP;免疫荧光染色是一种使用荧光团观察特异性结合其靶蛋白的抗体位置的免疫组织化学。 ...
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