| Assessing the Efficacy of Small Molecule Inhibitors in a Mouse Model of Persistent Norovirus Infection
|
|
Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] Human norovirus is the most common cause of acute gastroenteritis worldwide, resulting in estimated mortality of ~210,000 each year, of whom most are children under the age of five. However, norovirus can infect people of all age groups. There is a risk of prolonged infection in children, the elderly and patients who are immunocompromised. To study the inhibition of persistent norovirus replication by small molecule antivirals in vivo, we used a murine norovirus CR6 strain (MNV.CR6). We demonstrated earlier that efficient small molecules can reduce viral shedding in the stool of infected mice. Here we present how to generate the MNV.CR6 virus stock, infect type I and II interferon receptor knockout AG129 mice via oral gavage, administer antivirals to mice, and quantify viral ...
[摘要] 人类诺瓦克病毒是全球急性胃肠炎最常见的原因，估计每年约有210,000人死亡，其中大部分是5岁以下的儿童。 然而，诺如病毒可以感染所有年龄组的人。 儿童，老年人和免疫功能低下的患者有长期感染的风险。 为研究体内小分子抗病毒剂对持续诺如病毒复制的抑制作用，我们使用鼠诺沃克病毒CR6株（MNV.CR6）。 我们之前表明，高效小分子可以减少感染小鼠粪便中的病毒脱落。 在这里，我们介绍如何产生MNV.CR6病毒，通过口服灌胃感染I型和II型干扰素受体敲除AG129小鼠，给小鼠施用抗病毒药物，并量化这些小鼠粪便中的病毒基因组拷贝。
【背景】人诺瓦克病毒是胃肠炎的重要原因。尽管大多数诺罗病毒感染是急性和自限性的，但是在具有免疫缺陷状态的患者中，尤其是在实体器官和造血干细胞移植受体，接受化疗的患者和患有AIDS的患者中，感染可能变成慢性的（Westhoff等人， / em>，2009; Green，2014; Angarone 等。，2016）。在幼儿和老年人中也观察到延长的诺如病毒感染，导致疾病持续时间增加，排便增加和病毒脱落长达47天（Murata等人，2007; ...
|
|
|
| [2-3H]Mannose-labeling and Analysis of N-linked Oligosaccharides
|
|
Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Modifications of N-linked oligosaccharides of glycoproteins soon after their biosynthesis correlate to glycoprotein folding status. These alterations can be detected in a sensitive way by pulse-chase analysis of [2-3H]mannose-labeled glycoproteins, with enzymatic removal of labeled N-glycans, separation according to size by HPLC and radioactive detection in a scintillation counter.
[摘要] 其生物合成后不久，糖蛋白的N-连接寡糖的修饰与糖蛋白折叠状态相关。 可以通过脉冲追踪分析[2- 3 H]甘露糖标记的糖蛋白，通过酶切除标记的N-聚糖来检测这些变化，根据大小通过HPLC分离和放射性 在闪烁计数器中检测。
【背景】在将新生多肽进入ER后，进行若干翻译后修饰，这对于折叠，成熟和质量控制过程至关重要。加入核糖寡糖Glc 3 N 3 GlcNAc 2以产生N-连接的糖蛋白是非常常见的修饰，首先发生（Benyair等人，2011）。前体N-聚糖的加工通过在早期分泌室（Tannous等人，2015）中创建识别标签来引导糖蛋白成熟和质量控制机制。在后期阶段，在整个分泌途径中，寡糖的核心作为将糖链扩展成复合聚糖的平台，其结构涉及糖蛋白的运输和功能（Kamiya等人， ，2012）。由于早期N-连接的聚糖修饰反映糖蛋白生物合成和质量控制，寡糖加工已成为许多研究的主题（Avezov等人，2010; Hosokawa等人。，2010; Ninagawa等人，2014; Ogen-Shtern等人，2016）。糖蛋白组学方法大大改善了N-聚糖的表征，但它们不允许研究早期分泌途径中聚糖加工的动力学。
＆NBSP;这里我们描述一种用于分离和分析代谢标记的N-连接寡糖的简化脉冲追踪方法。该方法包括通过[2- H] ...
|
|
|
| Generation of a Cellular Reporter for Functional BRD4 Inhibition
|
|
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] The ubiquitously expressed bromodomain-containing protein 4 (BRD4) is an epigenetic reader, which recruits transcriptional regulatory complexes to acetylated chromatin. Because of its role in enhancing proliferation, BRD4 has become a therapeutic target in oncology, as the inhibition of this protein leads to the reduction of the growth of many tumours. Even though BRD4 is more and more studied, its mechanism of action has not been fully described yet. Therefore, we aimed at generating a cellular reporter system to monitor BRD4 inhibition. Such reporter can be potentially used in high throughput chemical and genetic screenings, in order to uncover new possible BRD4 functional pathways. The deeper understanding of the mechanism of action of BRD4 activity will certainly help in developing ...
[摘要] 普遍表达的含溴结构域的蛋白质4（BRD4）是表观遗传学读者，其将转录调节复合物募集到乙酰化染色质。 由于其在增强增殖中的作用，BRD4已经成为肿瘤学的治疗靶点，因为抑制这种蛋白质导致许多肿瘤的生长减少。 即使BRD4越来越多的研究，其行动机制尚未得到充分的描述。 因此，我们旨在产生细胞报告系统来监测BRD4抑制。 这种记录可以潜在地用于高通量化学和遗传筛选，以揭示新的可能的BRD4功能途径。 对BRD4活动作用机制的深入了解肯定有助于为所谓的BRD4依赖型癌症开发新的治疗策略。
【背景】表观遗传学领域的研究最近突出了BRD4在癌症进展中的中心作用。 BRD4是BET（溴结构域和终末外结构域）家族（Dey等人，2003; Filippakopoulos等人，2012; Wang）的乙酰赖氨酸阅读器， et al。，2012）能够结合启动子和增强子区域上的乙酰化组蛋白（Dey等人，2003; Filippakopoulos等人，2012; Nagarajan等人，，2014）。这种表观遗传学读者的作用机制在于通过招募几种转录因子，辅因子和RNA聚合酶II（RNApol II）来激活基因启动子和增强子，其导致调节，大部分增强某些靶基因的转录。已经描述了BRD4组蛋白模块发挥调控细胞周期进程的关键作用（Dey等人，2003; Wu和Chiang，2007; Yang等人， ...
|
|
|