| Measurement of the Intracellular Calcium Concentration with Fura-2 AM Using a Fluorescence Plate Reader
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Intracellular calcium elevation triggers a wide range of cellular responses. Calcium responses can be affected or modulated by membrane receptors mutations, localization, exposure to agonists/antagonists, among others (Burgos et al., 2007; Martínez et al., 2016). Changes in intracellular calcium concentration can be measured using the calcium sensitive fluorescent ratiometric dye fura-2 AM. This method is a high throughput way to measure agonist mediated calcium responses.
[摘要] 细胞内钙升高引发广泛的细胞反应。 钙响应可能受到膜受体突变，定位，暴露于激动剂/拮抗剂等的影响或调节（Burgos et al。，2007;Martínez等人，2016年））。 细胞内钙浓度的变化可以使用钙敏感荧光比例染料fura-2 AM测量。 该方法是测量激动剂介导的钙反应的高通量方法。
【背景】G蛋白偶联受体的激活触发了数百或数千个第二信使分子的产生。一旦被刺激，G蛋白偶联受体激活磷脂酶C（PLC），其将磷脂酰肌醇4,5-二磷酸酯（PIP 2 N）切割成二酰基甘油（DAG）和肌醇1 ，4,5-三磷酸酯（IP 3+）。 DAG保持膜结合，并且IP 3被释放到胞质溶胶中，其结合到内质网（ER）中的特异性IP 3'受体（钙通道）。这导致调节钙结合蛋白和蛋白激酶C（PKC）的激活的细胞内钙浓度的增加。因此，考虑到钙在生物系统中的重要性，已经建立了许多分析和测量Ca 2+水平的技术/方法。
＆NBSP;为确定细胞内Ca 2+浓度，荧光指示剂特别有用。 Ca 2 + 指示符可用于亲和力，亮度或光谱特性的变化。 Fura-2-乙酰氧基甲酯（fura-2 AM）是比例计算的钙指示剂fura-2的膜可渗透的非侵入性衍生物。 Fura-2 AM穿过细胞膜，一旦在细胞内，细胞酯酶除去乙酰氧基甲基。 Ca 2 + -bound fura-2 AM在335 ...
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| Isolation, Culturing, and Differentiation of Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Myogenesis is a multi-step process that leads to the formation of skeletal muscle during embryonic development and repair of injured myofibers. In this process, myoblasts are the main effector cell type which fuse with each other or to injured myofibers leading to the formation of new myofibers or regeneration of skeletal muscle in adults. Many steps of myogenesis can be recapitulated through in vitro differentiation of myoblasts into myotubes. Most laboratories use immortalized myogenic cells lines that also differentiate into myotubes. Although these cell lines have been found quite useful to delineating the regulatory mechanisms of myogenesis, they often show a great degree of variability depending on the origin of the cells and culture conditions. Primary myoblasts have been ...
[摘要] 造血是一种多步骤过程，导致在损伤的肌纤维的胚胎发育和修复期间骨骼肌的形成。在这个过程中，成肌细胞是主要的效应细胞类型，彼此融合或损伤肌纤维，导致新成肌纤维的形成或成年人骨骼肌的再生。通过体外成骨细胞分化成肌管可以概括出许多发生肌肉发育的步骤。大多数实验室使用也分化成肌管的永生化肌原细胞系。虽然已经发现这些细胞系对于描绘造血的调节机制非常有用，但是它们通常依赖于细胞的来源和培养条件而显示出很大的变异性。原代成肌细胞被认为是体外研究肌生成的最生理学相关模型。然而，由于成体骨骼肌的丰度低，原代成肌细胞的分离在技术上是有挑战性的。在本文中，我们描述了一种用于从小鼠的成年骨骼肌分离原代成肌细胞的改进方案。我们还描述了其培养和分化成肌管的方法。
背景 造血是一个复杂而高度协调的过程，其涉及多潜能中胚层细胞的测定，以产生成肌细胞，成肌细胞从细胞周期中排出，以及它们最终分化为骨骼肌纤维。 Myogen-5，MyoD，myogenin和MRF4的基因螺旋 - 环 - 螺旋转录因子的一组基因调控因子（MRFs）的顺序表达调控。 Myf-5和MyoD是成肌细胞形成，增殖和存活所需的主要MRFs，而其他MRF（如肌细胞生成素和MRF-4）在肌发生过程中起作用迟发，激活收缩蛋白和其他结构和代谢蛋白的基因表达（白金汉，2003; ...
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| Extraction and Reglucosylation of Barbarea vulgaris Sapogenins
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Author:
Date:
2013-07-20
[Abstract] Plants produce a vast array of natural compounds. Many of them are not commercially available, and are thus lacking to be tested as substrates for enzymes. This protocol describes the extraction and acidic hydrolysis of metabolites from Barbarea vulgaris with special focus on saponins and their agylcones (sapogenins). It was developed to determine if some B. vulgaris UDP-glucosyltransferases (UGTs) that were shown to glucosylate commercially available sapogenins, would also accept additional sapogenins from this plant as substrate, which are yet chemically uncharacterized and/or commercially unavailable (Figure 1).
Figure 1. Glucosylation reaction catalyzed by UGT73C10-UGT73C13 from ...
[摘要] 植物产生大量的天然化合物。 其中许多不是可商购的，因此缺乏作为酶的底物的测试。 该协议描述了从寻常型巴布巴属植物中提取和酸性水解代谢物，特别关注皂苷及其苷元（皂苷元）。 它被开发以确定是否有一些。 显示用于使市售皂苷元葡萄糖基化的普通UDP葡萄糖基转移酶（UGT）也将接受来自该植物的另外的皂苷元作为底物，其仍然是化学上未表征的和/或商业上不可获得的（图1）。
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