| Measurement of Mesenchymal Stem Cells Attachment to Endothelial Cells
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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] Mesenchymal stem cells (MSCs) have shown profound therapeutic potential in tissue repair and regeneration. However, recent studies indicate that MSCs are largely entrapped in lungs after intravenous delivery and die shortly. The underlying mechanisms have been poorly understood. We have provided evidence to show that excess expression and activation of integrins in culture-expanded MSCs is a critical cause of MSCs adhesion to endothelial cells of the lung microarteries resulting in the entrapment of the cells (Wang et al., 2015). Therefore, it may be meaningful to test the adhesive ability of MSCs to endothelial cells in vitro before intravenous administration to avoid their lung vascular obstructions. Here we report a simple method to measure MSCs attachment to ...
[摘要] 间充质干细胞（MSCs）在组织修复和再生中显示出深远的治疗潜力。 然而，最近的研究表明，MSCs在静脉内递送后很大程度上被截留在肺中并且很快死亡。 基本的机制一直不甚了解。 我们提供的证据表明培养扩增的MSCs中整联蛋白的过量表达和活化是MSCs与肺微动脉的内皮细胞粘附的关键原因，导致细胞的包埋（Wang等人 >，2015）。 因此，在静脉给药之前测试MSC对体外内皮细胞的粘附能力以避免它们的肺血管阻塞可能是有意义的。 在这里，我们报告了一种简单的方法来衡量MSC与内皮细胞的附着。
【背景】间充质干细胞（MSCs）正在成为一种极具潜力的治疗药物，许多临床试验正在进行中（Salem和Thiemermann，2010）。由于MSC的方便性和安全性，静脉输注MSCs已成为近期临床试验中MSCs治疗的流行途径（Wu and Zhao，2012）。然而，越来越多的证据表明，MSCs在血管内注射后引起相当大的血管阻塞。在静脉内输注时，超过80％的MSC被包埋在肺中，并且在急性缺血性心脏或脑中仅检测到少于1％的MSC（Lee等人，2009; Toma等人，等人，2009年）。
最近的研究表明，MSCs在静脉内给药后大部分停留在前毛细血管微血管中，并且其中大部分在短期内局部缺血死亡（Toma等人，2009）。因此，血管内给药的MSC的安全性和有效性已成为人们日益关注的问题。尚未完全了解MSCs血管阻塞的机制。 ...
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| Culture and Nucleofection of Postnatal Day 7 Cortical and Cerebellar Mouse Astroglial Cells
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Lineage reprogramming of astroglial cells isolated from different brain regions leads to the generation of different neuronal subtypes. This protocol describes the isolation and culture of neocortical and cerebellar astrocytes from postnatal mice. We also present a comprehensive description of the main steps towards successful gene delivery in these cells using nucleofection. Neocortex and cerebellum astrocyte cultures obtained with these methods are suitable for the study of molecular and cellular mechanisms involved in direct cell lineage reprogramming into induced neurons (iNs).
[摘要] 从不同脑区分离的星形胶质细胞的谱系重编程导致产生不同的神经元亚型。 该协议描述了来自出生后小鼠的新皮质和小脑星形胶质细胞的分离和培养。 因此，我们全面描述了使用nucleofection在这些细胞中成功进行基因传递的主要步骤。 在涉及直接细胞谱系重编程为诱导神经元（iNs）的分子和细胞机制研究中获得的新皮质和小脑星形胶质细胞培养物。
【背景】文献中广泛描述了星形胶质细胞培养（Saura，2007，Schildge等人，2013）。几种方案，主要是细胞分离的步骤数不同，产生足够纯度的星形胶质细胞培养物（高达98％）。然而，大多数方案被描述为“关注从新皮层分离星形胶质细胞并使用化学解离”（Schildge等人，2013）。在这里，我们提供了一种替代方法来产生高浓缩的星形胶质细胞单层，而不需要化学组织解离，这使得方案比以前的方法更快。此外，我们强调新皮层和小脑星形胶质细胞的分离和培养，突出了这两个细胞群体之间的一些重要差异。最后，我们描述了使用核转染在星形胶质细胞中基因递送的替代的，成本有效的方法（Chouchane等人，2017）。该技术由使用特定电压和试剂的细胞电穿孔后直接递送DNA分子组成。与逆转录病毒介导的转染相比（Heines等，2002; Berninger等） / ，2007，Heinrich等人，2012; ...
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| Immunofluorescence Analysis of Human Endocervical Tissue Explants Infected with Neisseria gonorrhoeae
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Colonization and penetration of the epithelium is the infection-initiating route of mucosal pathogens. The epithelium counteracts infection by eliciting host cell responses while maintaining the mucosal barrier function. The obligate human sexually transmitted bacterium Neisseria gonorrhoeae, or gonococcus (GC) infects the female reproductive tract primarily from the endocervical epithelium. Due to lack of an infection model that mimics all aspects of human infections in the female reproductive tract, GC pathogenesis is poorly understood. This protocol takes advantage of the viability and functional integrity of human cervical tissues propagated in culture to generate an ex vivo infection model. This tissue model maintains the nature of the infection target and ...
[摘要] 上皮的定植和穿透是粘膜病原体的感染启动途径。 上皮细胞通过引发宿主细胞应答来抵抗感染，同时维持粘膜屏障功能。 专性人类性传播细菌淋病奈瑟氏球菌或淋球菌属（GC）主要从宫颈内膜上皮感染女性生殖道。 由于缺乏模仿女性生殖道人类感染的各个方面的感染模型，GC发病机制知之甚少。 该方案利用培养物中繁殖的人宫颈组织的生存力和功能完整性来产生体外感染模型。 这种组织模型保持了感染目标和环境的性质，而没有任何操作，如病毒永生化上皮细胞。 使用免疫荧光显微镜，分析GC与子宫颈上皮细胞的相互作用。
【背景】淋病奈瑟菌（GC）感染人类生殖器上皮，引起淋病，一种常见的性传播感染。女性感染可导致严重的并发症，如盆腔炎，引起输卵管瘢痕和堵塞，易发生异位妊娠或不孕。由于抗生素耐药菌株的流行率增加，淋病又成为重要的公共卫生问题。由于人类是GC的唯一宿主，因此缺乏模仿人类感染各个方面的感染模型是推进我们对GC发病机理的理解的主要障碍。我们建立了人宫颈组织外植体模型和免疫荧光显微镜分析来检测GC感染妇女GC感染的主要部位人间宫颈细胞的机制。这种体外模型保持了宫颈上皮细胞的正常细胞构筑和组织完整性。使用这种模型和免疫荧光分析，我们表明，气相色氨酸定居和渗透到子宫颈组织，在那里他们可能导致症状和播散性淋球菌感染。 ...
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