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MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)

MEM非必需氨基酸溶液,100X

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: 11140050
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Enhancement of Mucus Production in Eukaryotic Cells and Quantification of Adherent Mucus by ELISA
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  The mucosal surfaces of the gastrointestinal, respiratory, reproductive, and urinary tracts, and the surface of the eye harbor a resident microflora that lives in symbiosis with their host and forms a complex ecosystem. The protection of the vulnerable epithelium is primarily achieved by mucins that form a gel-like structure adherent to the apical cell surface. This mucus layer constitutes a physical and chemical barrier between the microbial flora and the underlying epithelium. Mucus is critical to the maintenance of a homeostatic relationship between the microbiota and its host. Subtle deviations from this dynamic interaction may result in major implications for health. The protocol in this article describes the procedures to grow low mucus-producing HT29 and high mucus-producing ... [摘要]  胃肠道,呼吸道,生殖道和泌尿道的粘膜表面以及眼睛表面都有一个居住的微生物群落,它们与宿主共生并形成一个复杂的生态系统。脆弱的上皮细胞的保护主要通过形成附着于顶端细胞表面的凝胶样结构的粘蛋白实现。该粘液层构成了微生物菌群和下层上皮之间的物理和化学屏障。粘液对维持微生物群与宿主之间的稳态关系至关重要。与这种动态互动的细微差异可能会对健康产生重大影响。本文中的方案描述了生长低粘液产生HT29和高粘液产生HT29-MTX-E12细胞的程序,维持细胞并通过ELISA将其用于粘液定量。此外,还介绍了如何评估分泌黏液的数量。该系统可用于研究粘液对抗细菌毒素的保护作用,例如测试不同培养条件对粘液产生的影响或分析分子通过粘液层的扩散。由于本方案中使用的ELISA可用于不同的物种和粘液蛋白,因此也可以使用其他细胞类型。

【背景】身体与外部环境的界面由粘膜表面形成。这些粘膜上皮组织可以在例如胃肠道,呼吸道,生殖道和尿道以及眼睛表面发现。由于它们暴露于外部环境中,许多微生物会聚集在这些组织中。因此,这些上皮细胞已经进化出多种防御机制来回应其易受微生物攻击的影响。许多防御性化合物被分泌到粘膜液中,包括粘蛋白,抗体,防御素,protegrin,聚集蛋白,cathelicidins,溶菌酶,组蛋白和一氧化氮(Kagnoff和Eckmann,1997,Lu等人,2002 ...

Isolation of Microvascular Endothelial Cells
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. Murine endothelial cell culture is an important tool for cardiovascular disease research. This protocol demonstrates a quick, efficient method for the isolation of microvascular endothelial cells from murine tissues without any special equipment. To isolate endothelial cells, the lung or heart were mechanically minced and enzymatically digested with collagenase and trypsin. The single cell suspension obtained was then incubated with an anti-CD31, anti-CD105 antibody and with biotinylated isolectin B-4. The endothelial cells were harvested using magnetic bead separation with rat anti-mouse Ig- and streptavidin-conjugated microbeads. Endothelial cells were ... [摘要]  血管内皮是正常血管稳态所必需的。其功能障碍参与各种心血管疾病。小鼠内皮细胞培养是心血管疾病研究的重要工具。该协议演示了一种快速,有效的方法从小鼠组织中分离微血管内皮细胞而无需任何特殊设备。为了分离内皮细胞,将肺或心脏机械切碎并用胶原酶和胰蛋白酶进行酶促消化。然后将获得的单细胞悬浮液与抗CD31,抗CD105抗体和生物素化的异凝集素B-4温育。使用大鼠抗小鼠Ig-和链霉亲和素缀合的微珠,使用磁珠分离收获内皮细胞。扩张内皮细胞并收集用于随后的分析。这些培养物的形态和表型特征在培养10代以上保持稳定。在任何阶段没有过度生长的非内皮来源的污染细胞。

【背景】微血管内皮细胞通过调节白细胞再循环和作为T淋巴细胞的抗原呈递细胞而在免疫应答的发展中起中心作用。内皮的良好状态对血管稳态很重要。功能失调的内皮参与各种心血管疾病,包括动脉粥样硬化,血管炎和缺血/再灌注损伤(Cid et al。,2004; Wang等人,2007)。因此,体外培养的内皮细胞培养物是研究血管生理学和疾病病理学的重要工具。然而,分离原代鼠类内皮细胞被认为是特别困难的,因为大多数描述的方案涉及用消化酶灌注器官或大血管和耗时的纯化过程(Gumkowski等人,1987) 。

该协议的目的是提供一种简单的方法,不需要使用任何特殊设备即可从肺/心脏中分离和扩展内皮细胞。使用这种方法,我们以前补充了体内研究,证明了CD31信号传导在内皮细胞细胞保护中的重要性(Cheung等人,2015年)。 ...

Generating Loss-of-function iPSC Lines with Combined CRISPR Indel Formation and Reprogramming from Human Fibroblasts
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract]  For both disease and basic science research, loss-of-function (LOF) mutations are vitally important. Herein, we provide a simple stream-lined protocol for generating LOF iPSC lines that circumvents the technical challenges of traditional gene-editing and cloning of established iPSC lines by combining the introduction of the CRISPR vector concurrently with episomal reprogramming plasmids into fibroblasts. Our experiments have produced nearly even numbers of all 3 genotypes in autosomal genes. In addition, we provide a detailed approach for maintaining and genotyping 96-well plates of iPSC clones. [摘要]  对于疾病和基础科学研究而言,功能丧失(LOF)突变是非常重要的。 在这里,我们提供了一个简单的流线化协议来产生LOF iPSC系列,通过将CRISPR载体与附加型重编程质粒同时引入成纤维细胞,规避了传统基因编辑和已建立的iPSC系的克隆的技术挑战。 我们的实验已经产生了常染色体基因中所有3种基因型的几乎偶数。 此外,我们提供了一个详细的方法来维护和iPSC克隆的96孔板的基因分型。

【背景】CRISPR / Cas9技术允许简单且特异地针对特定基因组位置进行基因编辑。将该技术与诱导性多能干细胞(iPSC)的疾病建模和再生医学潜力相结合将继续对生物医学研究产生前所未有的影响。然而,使CRISPR / Cas9系统适应iPSC已经提出了几个挑战。在细胞系中进行基因编辑的传统方法是用表达Cas9蛋白质的质粒和指导RNA(gRNA)转染细胞,然后产生单克隆并筛选所需的遗传改变。不幸的是,iPSC不适用于单细胞克隆。已经开发了几种补充媒介和克隆方法来克服这一困难,但仍然充满昂贵的设备(低氧培养箱),困难的技术步骤(FACS分选的单个iPSC的存活)或劳动密集型方案(亚克隆)(Forsyth ,2006; Miyaoka ...

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