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MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)

MEM非必需氨基酸溶液,100X

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: 11140050
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Company-protocol()
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Generating Loss-of-function iPSC Lines with Combined CRISPR Indel Formation and Reprogramming from Human Fibroblasts
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract]  For both disease and basic science research, loss-of-function (LOF) mutations are vitally important. Herein, we provide a simple stream-lined protocol for generating LOF iPSC lines that circumvents the technical challenges of traditional gene-editing and cloning of established iPSC lines by combining the introduction of the CRISPR vector concurrently with episomal reprogramming plasmids into fibroblasts. Our experiments have produced nearly even numbers of all 3 genotypes in autosomal genes. In addition, we provide a detailed approach for maintaining and genotyping 96-well plates of iPSC clones. [摘要]  对于疾病和基础科学研究而言,功能丧失(LOF)突变是非常重要的。 在这里,我们提供了一个简单的流线化协议来产生LOF iPSC系列,通过将CRISPR载体与附加型重编程质粒同时引入成纤维细胞,规避了传统基因编辑和已建立的iPSC系的克隆的技术挑战。 我们的实验已经产生了常染色体基因中所有3种基因型的几乎偶数。 此外,我们提供了一个详细的方法来维护和iPSC克隆的96孔板的基因分型。

【背景】CRISPR / Cas9技术允许简单且特异地针对特定基因组位置进行基因编辑。将该技术与诱导性多能干细胞(iPSC)的疾病建模和再生医学潜力相结合将继续对生物医学研究产生前所未有的影响。然而,使CRISPR / Cas9系统适应iPSC已经提出了几个挑战。在细胞系中进行基因编辑的传统方法是用表达Cas9蛋白质的质粒和指导RNA(gRNA)转染细胞,然后产生单克隆并筛选所需的遗传改变。不幸的是,iPSC不适用于单细胞克隆。已经开发了几种补充媒介和克隆方法来克服这一困难,但仍然充满昂贵的设备(低氧培养箱),困难的技术步骤(FACS分选的单个iPSC的存活)或劳动密集型方案(亚克隆)(Forsyth ,2006; Miyaoka ...

GC/MS-based Analysis of Volatile Metabolic Profile Along in vitro Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells
Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract]  Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) are a promising tool in cell-based therapies for degenerative diseases. A safe application of hiPSCs in vivo, requires the detection of the presence of residual undifferentiated pluripotent cells that can potentially cause the insurgence of teratomas. Several studies point out that metabolic products may provide an alternative method to identify the different steps of cells differentiation. In particular, the analysis of volatile organic compounds (VOCs) is gaining a growing interest in this context, thanks to its inherent noninvasiveness. Here, a protocol for VOCs analysis from human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) is illustrated. It is based on Solid-Phase Microextraction (SPME) technique coupled with gas chromatography-mass ... [摘要]  人诱导的多能干细胞(hiPSC)是用于退化性疾病的基于细胞的疗法中的有前景的工具。 hiPSCs在体内的安全应用需要检测残留未分化多能细胞的存在,这可能会导致畸胎瘤的爆发。几项研究指出,代谢产物可能提供了另一种方法来确定细胞分化的不同步骤。特别是挥发性有机化合物(VOCs)的分析由于其固有的非侵入性而在这方面越来越受到关注。在这里,说明了从人诱导的多能干细胞(hiPSC)分析VOC的方案。它基于固相微萃取(SPME)技术与气相色谱 - 质谱联用(GC / MS)。该方法用于测量从绒毛膜样品(CVS)到hiPSC的细胞重编程期间和沿着hiPSC体外分化成早期神经祖细胞(NP)的细胞顶空中的挥发性代谢物修饰,穿过胚状体机构(EBs)的形成。

【背景】提出细胞代谢作为在分化的各个步骤期间研究干细胞的替代物。事实上,假设干细胞从多能性向完全分化的转变可能引起代谢产物的剧烈变化是合理的。在诱导的多能干细胞,亲本成纤维细胞和胚胎干细胞之间观察到了这种假设的第一个证据(Meissen等人,2012)。

在代谢产物中,挥发性有机化合物(VOC)吸引了人们对其收集的简单性,内在的非侵入性和广泛的分析方法的广泛关注(Boots et。,2015 ...

Obtaining Multi-electrode Array Recordings from Human Induced Pluripotent Stem Cell–Derived Neurons
Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract]  Neuronal electrical properties are often aberrant in neurological disorders. Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)-derived neurons represent a useful platform for neurological disease modeling, drug discovery and toxicity screening in vitro. Multi-electrode array (MEA) systems offer a non-invasive and label-free platform to record neuronal evoked-responses concurrently from multiple electrodes. To better detect the neural network changes, we used the Axion Maestro MEA platform to assess neuronal activity and bursting behaviors in hiPSC-derived neuronal cultures. Here we describe the detailed protocol for neuronal culture preparation, MEA recording, and data analysis, which we hope will benefit other researchers in the field. [摘要]  神经元电特性在神经疾病中经常是异常的。 人诱导的多能干细胞(hiPSC)衍生的神经元代表神经疾病建模,药物发现和体外毒性筛选的有用平台。 多电极阵列(MEA)系统提供了一个非侵入性的无标记平台,可同时记录来自多个电极的神经元诱发反应。 为了更好地检测神经网络变化,我们使用了Axion Maestro MEA平台来评估hiPSC衍生的神经元培养物中的神经元活动和爆裂行为。 在这里,我们描述了神经元培养准备,MEA记录和数据分析的详细方案,我们希望这将有益于该领域的其他研究人员。
【背景】人类诱导多能干细胞(hiPSC)技术目前正用于体外模拟神经和精神疾病。最近的研究已经证明,与特定疾病有关的某些细胞表型可以在盘中重现。神经电活动是神经系统功能的本质,代表了正常功能对于情绪,记忆,感觉形态和体内行为至关重要的交流的关键形式。在疾病状况下,电特性可能受到影响,因此了解基于hiPSC的神经疾病模型中的神经元电路连接性,生理学和病理学非常重要。

膜片钳和多电极阵列(MEA)技术是用于评估电生理学活性并由此评估神经元功能的主要技术。尽管膜片钳是研究单个细胞的活性和功能的强大的细胞内方法(Neher等人,1978),MEA平板具有记录细胞外动作电位(或尖峰)的能力,和同一板中数千个不同细胞同时的局部场电位,从而更好地理解网络水平的神经元活动(Hutzler等人,2006; ...

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