| Real-time Analysis of Auxin Response, Cell Wall pH and Elongation in Arabidopsis thaliana Hypocotyls
|
|
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract] The rapid auxin-triggered growth of the Arabidopsis hypocotyls involves the nuclear TIR1/AFB-Aux/IAA signaling and is accompanied by acidification of the apoplast and cell walls (Fendrych et al., 2016). Here, we describe in detail the method for analysis of the elongation and the TIR1/AFB-Aux/IAA-dependent auxin response in hypocotyl segments as well as the determination of relative values of the cell wall pH.
[摘要] 拟南芥下胚轴的快速生长素触发的生长涉及核TIR1 / AFB-Aux / IAA信号传导并伴随质外体和细胞壁的酸化（Fendrych 等，2016）。 在这里，我们详细描述了在下胚轴节段中的延伸和TIR1 / AFB-Aux / IAA依赖性生长素响应的分析方法以及细胞壁pH的相对值的确定。
【背景】植物激素生长素诱导拟南芥下胚轴的快速生长。 这个过程需要TIR1 / AFB-Aux / IAA生长素共同受体。 生长素促进TIR1 / AFB和Aux / IAA的结合，导致后者的泛素化和降解，并导致生长素应答基因的转录。 这个协议的重点是测量拟南芥下胚轴的生长，生长素信号和细胞壁酸化。 该协议是基于以前Schenck等人的工作，2010年，Takahashi等人，2012年，Fraas 等人，2014年 和Spartz 等。，2014; 但与已发表的工作不同，我们描述了能够测量下胚轴生长期间发生的更大范围过程的程序; 从肉眼可见的器官伸长，通过共焦显微镜监测的细胞壁pH到通过荧光素酶生物发光显现的实时核生长素信号传导。
|
|
|
| Detection of Protein S-nitrosothiols (SNOs) in Plant Samples on Diaminofluorescein (DAF) Gels
|
|
Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] In plant cells, the analysis of protein S-nitrosothiols (SNOs) under physiological and adverse stress conditions is essential to understand the mechanisms of Nitric oxide (NO)-based signaling. We adapted a previously reported protocol for detecting protein SNOs in animal systems (King et al., 2005) for plant samples. Briefly, proteins from plant samples are separated via non-reducing SDS-PAGE, then the NO bound by S-nitrosylated proteins is released using UV light and, finally, the NO is detected using the fluorescent probe DAF-FM (Rodriguez-Ruiz et al., 2017). Thus, the approach presented here provides a relatively quick and economical procedure that can be used to compare protein SNOs content in plant samples and provide insight in NO-based signaling ...
[摘要] 在植物细胞中，生理和不利胁迫条件下的蛋白质S-亚硝基硫醇（SNO）的分析对于了解一氧化氮（NO）的信号传导机制至关重要。 我们调整了以前报告的用于检测动物系统中蛋白质SNO的方法（King等，2005），用于植物样品。 简言之，通过非还原性SDS-PAGE分离来自植物样品的蛋白质，然后使用UV光释放由S-亚硝基化蛋白质结合的NO，最后使用荧光探针DAF-FM检测NO（Rodriguez-Ruiz et 等等，2017）。 因此，本文提出的方法提供了相对快速和经济的方法，可用于比较植物样品中的蛋白质SNOs含量，并提供植物中基于NO的信号传导的洞察。
【背景】一氧化氮（NO）是一种自由基，可与各种生物分子阵列相互作用，包括蛋白质，脂质和核酸。在蛋白质的情况下，最相关的翻译后修饰（PTM）之一是NO基团与存在于肽或蛋白质中的半胱氨酸（Cys）的硫醇（-SH）侧链的共价连接。该修饰产生称为S-亚硝基硫醇（SNO）的家族，其是动物和植物系统中重要的化合物（Foster等人，2003; Lindermayr和Durner，2009; Astier等人，2011; ...
|
|
|
| Rice Lamina Joint Inclination Assay
|
|
Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Brassinosteroids (BRs) promote rice lamina inclination. Recently, we showed that OsBUL1 knockout mutant rice (osbul1) is defective in brassinosteroid signaling (Jang et al., 2017). To show that lamina joint inclination of osbul1 is less-sensitive than WT to exogenous brassinolide (BL) treatment in the lamina joint inclination bioassays, we applied the protocol presented below. The protocol focuses on: (1) how to prepare rice samples for the assay, and (2) how to treat BL exogenously. Finally, we have added a result showing lamina inclination between WT and osbul1 in BL solutions of various concentrations.
[摘要] 油菜素类固醇（BR）促进水稻倾角。 最近，我们显示，OsBUL1敲除突变体水稻（osbul1 ）在油菜素内酯信号传导中有缺陷（Jang等人，2017）。 为了显示在层板关节倾斜生物测定中，osbul1 的椎板关节倾斜对外源油菜素内酯（BL）处理的敏感性低于WT，我们应用了下面提出的方案。 方案重点是：（1）如何准备水稻样品进行测定，以及（2）如何外源性处理BL。 最后，我们在不同浓度的BL溶液中添加了显示WT和osbul1 之间的椎板倾斜度的结果。
【背景】稻叶关节连接叶片和鞘，对叶角特征有显着贡献，BR是性状的主要调节因子，而其他植物激素（包括乙烯，赤霉素和生长素）也影响叶角（Gan et al。，2015）。更直立的叶片有助于阳光的渗透，提高光合作用效率，占据较少的密集种植空间（Sakamoto等人，2006）。因此，稻米倾角是影响水稻植物结构的主要农艺性状之一。实际上，Wada主要开发的稻米倾斜测定法，他的同事们是BR的高度特异性和敏感的生物测定（Wada等人，1981年和1984年）。在这种生物测定中，BR的处理相对于接合区域中的背轴细胞诱导更大的细胞扩增，导致层状倾斜（Takeno和Pharis，1982; ...
|
|
|