| High Dimensional Functionomic Analysis of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells at a Single Cell Level
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] The ability to conduct investigation of cellular transcription, signaling, and function at the single-cell level has opened opportunities to examine heterogeneous populations at unprecedented resolutions. Although methods have been developed to evaluate high-dimensional transcriptomic and proteomic data (relating to cellular mRNA and protein), there has not been a method to evaluate corresponding high-dimensional functionomic data (relating to cellular functions) from single cells. Here, we present a protocol to quantitatively measure the differentiation potentials of single human hematopoietic stem and progenitor cells, and then cluster the cells according to these measurements. High dimensional functionomic analysis of cell potential allows cell function to be linked to molecular ...
[摘要] 在单细胞水平进行细胞转录，信号传导和功能调查的能力为以前所未有的决议研究异质人群开启了机会。 尽管已经开发了评估高维转录组学和蛋白质组学数据（与细胞mRNA和蛋白质有关）的方法，但尚未有方法从单个细胞评估相应的高维功能组学数据（与细胞功能有关）。 在这里，我们提出了一种方案来定量测量单个人造血干细胞和祖细胞的分化潜能，然后根据这些测量结果聚集细胞。 细胞电位的高维功能组分析允许细胞功能与相同祖细胞群体内的分子机制相关联。
【背景】单细胞水平的细胞转录，信号传导和功能单细胞测量技术的发展，以及流式细胞仪等先前存在的技术的发展，使得新镜头能够检测复杂的异质群体。这些方法产生大量数据，这可以借助于降维算法来解释，如使用Mpath，Monocole，PCA，Wishbone或扩散图算法在单细胞RNA-Seq上所示的（Paul等， 2016年;参见 et al。，2017），以及使用tSNE或PhenoGraph的CyTOF（Amir et al。，2013; Levine et al 。，2015）。
我们开发了这个协议，以允许在单细胞环境中对造血祖细胞的大规模培养物进行功能分析和随后的降维。在这个协议中，我们描述了在细胞因子的基质细胞培养物中培养人CD34 ...
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| Construction of NSG-CTL Mice
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Author:
Date:
2013-02-20
[Abstract] The NSG-CTL mouse model is a humanized mouse model that allows the generation of peripheral human immune responses, particularly CD8+ Cytotoxic T lymphocyte (CTL) responses, and serves as an effective model for studying gene-based therapies. Natural antigen-specific T cell responses in humanized mice are relatively weak and this model was developed to boost antigen specific responses, in this case to HIV, to more closely assess these responses in vivo. We have engineered human T cells that develop in these mice to express a molecularly cloned T cell receptor (TCR) specific to HIV. Cloned TCRs to any antigen can theoretically be used to study specific responses in vivo, as long as the tissue that is manipulated is of the same human leukocyte antigen (HLA) type. The ...
[摘要] NSG-CTL小鼠模型是允许产生外周人免疫应答，特别是CD8 +细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答的人源化小鼠模型，并且作为研究基于基因的治疗的有效模型。人源化小鼠中天然抗原特异性T细胞应答相对较弱，并且开发这种模型以加强抗原特异性应答，在这种情况下是HIV，以更密切地评估这些体内的反应。我们已经设计在这些小鼠中发展的人T细胞，以表达对HIV特异性的分子克隆的T细胞受体（TCR）。克隆的TCR与任何抗原理论上可用于研究体内的特异性应答，只要所操作的组织是相同的人白细胞抗原（HLA）类型。具有抗原特异性TCR的造血干细胞的修饰允许在这些小鼠的外周中形成成熟的，功能性T细胞，其在正常发育过程之后对该抗原是特异性的。该模型最近已经发表（Kitchen等人，2012），这是Melkus等人发表的人源化小鼠BLT模型的主要修饰。 （2006）。我们使用非肥胖糖尿病（NOD） - 严重联合免疫缺陷（SCID），常见的γ链敲除（γc -/- ）或NSG小鼠，并植入胎儿胸腺片与基因修饰的CD34 +造血干细胞从胎儿肝脏分离，在肾囊下发育成功能性胸腺植入物。同时，我们通过全身照射消耗小鼠的骨髓，并静脉内注射更多的修饰的HSC用于在小鼠骨髓中造血植入。该协议概述了处理胎儿组织的过程，使用表达分子克隆的T细胞受体的慢病毒载体基因转导HSC，并进行囊下肾移植手术。
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| Isolation of Human Blood Progenitor and Stem Cells from Peripheral Blood by Magnetic Bead
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Author:
Date:
2012-11-05
[Abstract] The antigen CD34 is a well-known marker present on human progenitor and stem cells. This protocol explains the isolation of CD34+ cells from peripheral blood using magnetic bead separation technique. The approximate abundance of CD34+ cells in blood is 0.1% of mononuclear cells.
[摘要] 抗原CD34是存在于人祖细胞和干细胞上的公知标记。 该方案解释了使用磁珠分离技术从外周血中分离CD34 +细胞。 血液中CD34 +细胞的大致丰度为0.1％的单核细胞。
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