| A Blood-retina Barrier Permeability Assay in Young Mice Using Sulfo-NHS-LC-biotin Perfusion
|
|
Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] Brain and retinal vasculatures exhibit restricted vascular permeability known as blood-brain barrier and blood-retina barrier. Vascular permeability can be evaluated by perfusion of the amine reactive ester derivatives of biotin such as sulfo-NHS-LC-biotin. This protocol describes experimental procedures of sulfo-NHS-LC-biotin perfusion to evaluate retinal vascular permeability. Perfused sulfo-NHS-LC-biotin remained within vessels in wild-type postnatal day 15 (P15) retinas, confirming an intact blood-retina barrier. In contrast, sulfo-NHS-LC-biotin was occasionally detected in extravascular spaces in perfused Eogt−/− retinas suggesting a partly impaired vascular integrity in the absence of Eogt (Sawaguchi et al., 2017).
[摘要] 脑和视网膜脉管系统表现出受限的血管通透性，称为血脑屏障和血 - 视网膜屏障。 血管通透性可以通过灌注生物素的胺反应性酯衍生物如磺基-NHS-LC-生物素来评估。 该方案描述了磺基-NHS-LC-生物素灌注的实验程序，以评估视网膜血管通透性。 灌注的磺基-NHS-LC-生物素保留在野生型出生后第15天（P15）视网膜的血管内，证实了完整的血 - 视网膜屏障。 相比之下，在灌注的 Eogt - / - >视网膜中，偶尔会在血管外空间检测到磺基-NHS-LC-生物素，这表明在没有的情况下血管完整性部分受损。 Eogt >（Sawaguchi et al。>，2017）。
|
|
|
| Dissection and Whole Mount Staining of Retina from Neonatal Mice
|
|
Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Here we provide a detailed protocol for whole mount staining of mouse retina. This protocol was used to analyze retinal angiogenesis in newborn mice (Sawaguchi et al., 2017) by modifying the original protocols (Powner et al., 2012; Tual-Chalot et al., 2013). This protocol can also be used for whole mount staining of adult retina.
[摘要] 在这里，我们提供了小鼠视网膜整体染色的详细方案。 该方案用于分析新生小鼠的视网膜血管生成（Sawaguchi et al。，2017），修改原始方案（Powner et al。，2012; Tual-Chalot et al。，2013）。 该方案也可用于成人视网膜的整体染色。
|
|
|
| Isolation of Murine Brain and Lung Microvascular Endothelial Cells
|
|
Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] This protocol describes how to isolate murine endothelial cells from newborn mice brain and 3-month-old mice lung by modifying the original protocols (Sobczak et al., 2010; Ruck et al., 2014). We have used the protocol to analyze mRNA expression level in brain endothelial cells (Sawaguchi et al., 2017). Isolated lung endothelial cells were expanded in vitro for various downstream experiments such as gene expression analysis and cell-based signaling assay.
[摘要] 该协议描述了如何通过修改原始方案从新生小鼠脑和3个月大的小鼠肺中分离鼠内皮细胞（Sobczak et al。，2010; Ruck et al。，2014）。 我们使用该方案分析脑内皮细胞中的mRNA表达水平（Sawaguchi et al。，2017）。 分离的肺内皮细胞在体外扩增用于各种下游实验，例如基因表达分析和基于细胞的信号传导测定。
【背景】 该方案描述了从小鼠脑和肺中分离鼠内皮细胞的实验程序。 我们使用新生小鼠使用抗CD31抗体分离脑内皮细胞。 使用该方案，可以从脑内皮细胞中分离出适合于基因表达分析的2μg总RNA，尽管不能完全消除周细胞和星形胶质细胞。 我们还使用3个月大的小鼠肺使用抗CD31和抗CD102抗体分离肺内皮细胞。 将分离的肺内皮细胞在体外6cm培养皿中扩增，并用于各种下游实验，例如基因表达分析和基于细胞的信号传导测定。
|
|
|